Методы окрашивания: 12 современных техник с фото и названиями

Методы окрашивания тканей | Полезные статьи

Методы окрашивания тканей

Процесс, при котором тканям придают разнообразные окраски при помощи особых химических соединений, называют крашением.

По назначению и предъявляемым требованиям к определенным изделиям из ткани определяют уровень устойчивости и характер окраски. На устойчивость окрашивания влияют такие моменты, как процессы стирки, загрязнение атмосферы, обработка в условиях повышенной влажности, чистка химическими средствами, реакция на свет, пот, условия погоды, трение и т.д.

Выбирая красители и способ окрашивания, которые влияют на устойчивость и равномерность окраски, необходимо знать не только свойства волокон, но и их непостоянные параметры: давление, температуру и дополнительные вещества, необходимые для обработки текстиля в ходе окраски.

Существует три основных метода окрашивания текстильных материалов: периодическое, непрерывное и печатание.

1. Периодическое окрашивание

Периодическая окраска чаще всего применяется в текстильной промышленности. Одна партия единовременно окрашиваемых материалов может составлять до 500 кг. Второе название данного процесса окраски – вытяжное. Название обусловлено поэтапным переходом красящего вещества в материал из красильной ванны. Основное правило периодического окрашивания – это повышение возможностей выбора различных цветов и уменьшение финансовых затрат при приближении к окончанию процесса окраски.

Аппараты для окрашивания функционируют при температурах более 100 градусов, при достаточной герметичности температура может повышаться. Хлопчатобумажные, шерстяные, нейлоновые и вискозные волокна прокрашиваются при температуре до 100 градусов, а волокна полиэфира и синтетические волокна необходимо окрашивать при температуре выше 100 градусов.

В промышленности применяются три вида аппаратов периодического действия для окрашивания тканей:

1. С перемещением материала;
2. С циркуляцией красящего вещества;
3. С перемещением материала и циркуляцией красящего вещества.

Хорошим примером процесса периодического действия с перемещением и материала, и красящего вещества является струйное крашение.

2. Непрерывное крашение

Данный вид окраски применяется для смесовых изделий из хлопка и полиэфира. Устройства для непрерывного крашения наиболее эффективны при окраске длинных тканевых полос по всей поверхности в единый цвет. Ткани, получаемые в процессе непрерывного (гладкого) окрашивания, называют гладкокрашеными.

Данный вид окрашивания не идет на окраску коротких полос материала. В течение часа таким способом можно окрасить до 9 тысяч метров текстильного материала. Смесовые ткани из хлопка и полиэфира окрашиваются за единственный пропуск через устройство окраски. Волокна полиэфира проходят процесс окраски на начальных уровнях при высоких температурах (термофиксация), а волокна хлопка и вискозы проходят процесс окраски на следующих этапах с закреплением окраски паром.

Разработка и дальнейшее развитие способов окрашивания текстильных материалов на сегодняшний день направленно не только на увеличение производительности и улучшение качества выпускаемых изделий, но и на использование новых современных технологий, обеспечивающих снижение нагрузки на экологию за счет снижения токсичности применяемых средств для окрашивания и развития, новых более безопасных технологий.

Описание: 
Методы окрашивания тканей

Техники окрашивания

Независимо от того, хотите ли вы изменить свои волосы или записались на курсы парикмахеров, вы можете еще не знать о различиях, процессах и результатах различных техник осветления волос. Не переживайте! Мы поможем вам узнать, как выглядят различные методы осветления волос!

МЕЛИРОВАНИЕ ВОЛОС

Мелирование — является самым распространенным способом осветления и придания объемности монотонным волосам. Техника набрала популярность в 90-х годах. Базовый цвет окрашивается или сохраняется неизменным, а выделенные пряди волос на несколько оттенков светлее. Для мелирования волосы обесцвечиваются прядями определенной толщины , начиная с корня до самого конца. Затем обесцвеченные волосы оборачивают в фольгу для обработки в течение от 20 минут до часа, в зависимости от желаемой степени подбора цвета.

Мелирование волос: достоинства

• Мелирование волос – один из лучших способов стать блондинкой;
• эта процедура хорошо скрывает седину;
• Переход между корнями и концами волос заметен гораздо слабее, нежели при окрашивании;
• Процедуру можно проводить один раз в 2-3 месяца;
• Волосы после мелирования выглядят красиво и ярко.

Мелирование волос: недостатки

• Не рекомендуется проводить эту процедуру минимум в течение месяца после химической завивки;
• Не рекомендуется проводить процедуру на волосах после их длительного окрашивания хной. В результате можно не получить желаемый оттенок;
• Не рекомендуется проводить мелирование волос во время беременности или при гормональном дисбалансе. Также лучше отказаться от процедуры, если волосы сильно повреждены и требуют восстановления и лечения. Не стоит в данном случае также окрашивать волосы во время беременности.
• При коррекции мелирование, попадая на ранее обесцвеченные пряди, волосы теряют качество волос. Становятся ломкими. В наше время это уже решаемая проблема. Появились препараты которые сохраняют качество волос при повторном обесцвечивании

МРАМОРНОЕ ОКРАШИВАНИЕ

Previous


Next

Как мы уже озвучили ранее, МРАМОРНОЕ ОКРАШИВАНИЕ, это не новая техника! Нам она была известна 20 лет назад. А возможно и раньше. Сейчас трудно найти человека, который сделал это первым. Но, мы точно знаем ее придумали для того, чтобы усилить яркость оттенка, придать ошеломляющий блеск тусклым волосам или мягкий эффект выгоревших волос. Эта техника раскрывает оттенок красителя разными переливами. Мраморное окрашивание это работа с цветом (краситель) в соединении с обесцвечивающими препаратами.

Мраморное окрашивание волос: достоинства

• Одним из первых преимуществ этого метода скорость выполнения. Которая положительно сказывается на сервисе. Время скоростей. Все клиенты мечтают о быстром и ошеломляющем результате
• Расход красителей. Техника выполняется на влажные волосы. Что значительно экономит краситель. И несомненно сказывается на цене.
• Простота выполнения. Облегчает работу и экономит вашу энергию
• Качество волос остается на очень высоком уровне или улучшает поврежденные волосы
• Долговечность окрашивания. Коррекция не ранее чем через 2 месяца и более

Мраморное окрашивание волос: недостатки

• Окрашивание получается в теплых или нейтральных оттенках. Для получения холодных оттенков, следует протонировать после окрашивания, нейтрализацией нежелательного оттенка

ШАТУШ

Previous


Next

Шатуш — современный тренд, известный с 2000 годов. Основа Шатуш- начес, в который уходит определённый процент волос из пряди, оставшиеся волосы осветляются, при этом пряди могут заворачиваться в конверты из фольги.

Техника шатуш: достоинства

• Универсальность. Позволяет создать эффект от выгоревших на солнце волос до тотального блонда, а также возможность получения плавных переходов от темных корней к светлым прядям по всей остальной длине волос.
• Шатуш дает очень плавный цветовой переход на волосах. , от темных корней к светлым прядям по всей остальной длине волос
• Повторный визит от 3−4 месяца.

Техника шатуш: недостатки

• Затратно по времени
• Сложная техника
• Дорого

БАЛАЯЖ

Previous


Next

Весьма модная в последнее время техника окрашивания — балаяж берет начало в далеких 70-х, являясь удачной находкой французских парикмахеров. Одна из техник окрашивания волос, создающая впечатление «выгоревших на солнце прядей». Данный вид техники способствует визуальному увеличению объема волос, создает «глубину» что поможет людям с невысокой плотностью волос или девушкам со стрижками, нуждающимися в придании дополнительного объема. Как и при создании любой растяжки, окрашивание происходит в два этапа:сначала при помощи осветляющего состава на волосах создается нужный рисунок, а затем происходит тонирование в желаемый цвет.

Балаяж является разновидностью мелирования. Осветляющий состав наносится на отдельные, достаточно толстые пряди. Прокрашивается только поверхность пряди, сердцевина должна остаться нетронутой. Пряди нельзя заворачивать в конверты из фольги, потому что в этом случае прядь будет испорчена. Пряди можно только проложить фольгой, отделив друг от друга. Так самым создается нужный рисунок, переходы и эффект выгоревших волос во время летнего отпуска. Цель данной техники окрашивания в создании растяжки цвета с характерными «ребрами жесткости».

Техника балаяж: достоинства

• Щадящее осветления
• Эффект выгоревших волос. Natural
• Повторный визит от 3−4 месяца.
• Балаяж подходит для волос различных структур: тонких, вьющихся, прямых, пушистых и т.д.

Техника балаяж: недостатки

• Всегда тёплые оттенки
• Сложная техника
• Дорого

А вы хотели бы добавить изменения своим волосам? Посетите нашу Академию ! Наши студенты и специалисты обучаются всем новейшим методам осветления волос. Вы можете связаться с нами в Direct или +7(4012) 37-99-30 , чтобы сделать услугу осветления волос или записаться на обучение , если вы заинтересованы в самостоятельном изучении этих техник на наших курсах по колористике и техникам по окрашиванию волос!

Stains — Microbiology Resource Center

Соображения безопасности

Будьте осторожны с аэрозолями при переносе бактерий из петли на предметное стекло. Петля очень гибкая, и ее легко отключить от петли, полной организмов. Не думайте, что ваш организм мертв. Фиксация тепла или метанола не гарантирует уничтожения организма. Выбрасывайте заполненные предметные стекла в ведро с дезинфицирующим средством на рабочем месте.

Общие соображения

Вы стремитесь получить легкую суспензию клеток, которая оставит на предметном стекле слабое мутное пятно. У вас много места на слайде; используй это! Сначала полезно нарисовать круг в нижней части слайда, чтобы вы знали, где искать мазок. Очень легко запутаться, на какой стороне слайда находится ваш мазок. Обязательно пометьте дальний край слайда. Делайте это постоянно на одном и том же конце слайда, чтобы сориентировать слайд.

Наберитесь терпения и дайте предметному стеклу высохнуть на воздухе, прежде чем приклеивать его к предметному стеклу. Если предметное стекло будет влажным и вы зафиксируете его нагреванием, бактерии закипят, и клеточная морфология будет потеряна. Если ваше предметное стекло мокрое и зафиксируйте его в метаноле, оно, скорее всего, смоется. Слишком толстые мазки, скорее всего, смоются с предметного стекла независимо от метода фиксации.

Мазок из бульона

С бульонными культурами обычно легче работать, поскольку клетки уже разведены в бульоне. Обязательно тщательно перемешайте культуральную пробирку, чтобы суспендировать бактерии в бульоне.

1. Назовите слайд. Асептически перенесите полную петлю организма в центр предметного стекла.
2. Используйте плоскую часть петли, чтобы размазать каплю бульона вокруг предметного стекла. Используйте спиралевидные круговые движения, чтобы распределить каплю. Поскольку бульон полон белка, мазок обычно остается расплывчатым и не образует комочков на поверхности предметного стекла.
3. Отложите предметное стекло для просушки на воздухе. Это займет как минимум несколько минут. Не торопитесь с этим шагом.

Мазок с чашки

Петлей можно удалить много микроорганизмов. Вы можете использовать иглу для прививки, чтобы перенести свой организм на предметное стекло. Обязательно используйте стерильную воду для разбавления образцов. Обычная водопроводная вода или деионизированная вода в бутылках для ополаскивания часто заражены бактериями.

1. Назовите слайд. Асептически перенесите петлю со стерильной водой в центр предметного стекла.
   • Это служит как для разбавления ваших бактерий, так и для распространения.
2. Выберите хорошо изолированную колонию.
3. Уколите стерильной иглой или слегка зачерпните край колонии стерильной петлей.
4. Поместите иглу/петлю в центр капли и круговыми движениями по спирали распределите бактерии по предметному стеклу.
5. Отложите предметное стекло для просушки на воздухе. Это займет как минимум несколько минут. Не торопитесь с этим шагом.

Фиксация

Процедура фиксации одинакова независимо от источника мазка, планшета или бульона. Существует два метода прикрепления бактерий к предметному стеклу: термофиксация или фиксация метанолом. Термофиксация используется только с организмами BSL1. Организмы, с которыми мы будем работать, относятся к BSL2, поэтому вам нужно будет использовать метод фиксации метанола. Тепловая фиксация предметного стекла может привести к образованию аэрозолей, и с организмами BSL2 мы должны максимально предотвратить это. Фиксация метанола вызывает меньше изменений в клеточной морфологии и не создает аэрозолей.

Пожалуйста, будьте осторожны при работе с метанолом, если вы забудете, что закрепили его метанолом, и ваше предметное стекло не полностью высохнет, оставшийся метанол загорится.

Фиксатор метанола (BSL2)

1. Убедитесь, что предметное стекло абсолютно сухое. Установите его на стойку для окрашивания над раковиной.
2. Осторожно залейте предметное стекло 95% метанолом. Дайте постоять две минуты.
3. Наклоните предметное стекло и слейте метанол.
   • Прикоснитесь краем предметного стекла к бумажному полотенцу, чтобы удалить лишний метанол.
4. Перед окрашиванием отложите предметное стекло для просушки на воздухе.

Простое окрашивание

Простое окрашивание

Простое окрашивание — это просто: добавьте один краситель на фиксированное предметное стекло, дайте ему впитаться, смойте, дайте высохнуть и посмотрите. Это быстрая процедура для определения наличия и морфологии бактерий в клинических образцах, таких как стул и выделения.

Метиленовый синий используется для определения морфологии веретенообразных и спирохет при инфекциях полости рта. Это также краситель выбора для идентификации метахроматических гранул в Коринебактерии дифтерии . Гранулы будут окрашиваться в более глубокий синий цвет, чем окружающие синие бактерии. Другие виды Corynebacterium не имеют метахроматических гранул. Подойдут любые основные красители, такие как метиленовый синий, кристаллический фиолетовый, малахитовый зеленый или сафранин.

Основные (катионные или положительно заряженные) красители связываются с отрицательно заряженными компонентами клеточной мембраны и цитоплазмы.

Материалы

• Метиленовый синий
• Сафранин
• Кристально-фиолетовый
• Зеленый малахит
• Стойки для окрашивания
• Микроящики для инструментов
• Подготовленные предметные стекла

Общие положения

Окрашивание — это и искусство, и наука. Не существует жестких и быстрых правил для окрашивания и времени полоскания. Перечисленное время является рекомендациями, которые обычно работают хорошо. Вам нужно будет поэкспериментировать с тем, что работает с имеющимися у вас бактериями, и с методами, которые вы используете.

Очень важно, чтобы вы точно записывали, что вы делаете, и результаты, которые вы наблюдаете, в лабораторном журнале. Вы будете повторять эти окрашивания позже в семестре, и вы не хотите тратить свое время на повторное изобретение вашей успешной процедуры окрашивания. Было бы полезно, если бы каждый сотрудник лабораторного стола выбрал разные пятна, чтобы вы могли видеть, как они все выглядят.

Простая процедура окрашивания

1. Поместите тщательно подготовленные фиксированные предметные стекла на подставку для окрашивания над раковиной.
   • Делайте слайды по одному.
   • Покройте мазок любым доступным вам основным красителем.
   • Вам нужно ровно столько красителя, чтобы покрыть мазок. Пятно не должно капать с предметного стекла.
2. Оставьте пятно на 1-5 минут.
3. Используя прищепку, возьмитесь за длинный конец горки, наклоните горку над раковиной и смойте пятно струей воды из промывочной бутылки.
   
   • Обязательно распыляйте поверх мазка и дайте ему стекать.
   • Если вы распыляете непосредственно на мазок, вы можете смыть мазок с предметного стекла.
   • Промывать до тех пор, пока вода не станет прозрачной или слегка окрашенной.
4. Прикоснитесь краем предметного стекла к бумажному полотенцу, чтобы удалить лишнюю воду. Теперь вы можете дать ему высохнуть на воздухе. В качестве альтернативы вы можете высушить его промокательной бумагой, поместив ее в книгу для промокательной бумаги и слегка нажав. Хотя этот метод быстрее, вы также можете промокнуть плохо прилипший мазок.
5. Просмотрите предметное стекло при погружении в масло и запишите свои наблюдения в журнале лабораторных работ.
6. Выбросьте использованные окрашенные предметные стекла в ведро с дезинфицирующим средством в раковине.

Негативное окрашивание

Негативное окрашивание

Негативное окрашивание еще проще, чем простое окрашивание, поскольку вам не нужно делать мазок. Каплю клеток наносят на предметное стекло и просматривают без фиксации. Пятно представляет собой взвесь углерода, обнаруженного в туши или нигрозине. Частицы углерода заряжены отрицательно, как и клеточная мембрана. Фон выглядит черным или окрашенным в цвет сепия, а клетки остаются прозрачными, так как они отталкивают краситель.

Некоторые положительно заряженные включения, такие как сера, могут окрашиваться. Это окрашивание дает точную информацию о морфологии клеток и наличии капсулы, поскольку клетки не фиксируются. Размер клеток кажется немного больше, потому что любые внеклеточные покрытия или выделения снаружи клеточной мембраны также не окрашиваются. Отрицательное окрашивание полезно для быстрого определения присутствия Cryptococcus neformans , возбудителя криптококкоза, в спинномозговой жидкости. Этот метод также используется при окрашивании эндоспор и капсул.

Материалы

• Краситель нигрозин
• Ассорти культур

Общие положения

Как и при приготовлении мазка, вам потребуется лишь небольшое количество микроорганизма. Если у вас слишком много организмов, вы не сможете увидеть морфологию отдельных клеток. Также важно не использовать слишком много нигрозина. Если он слишком толстый, фон будет иметь потрескавшийся вид, похожий на лужи грязи, высыхающие на солнце. Вы хотите получить светлую пленку. Ваш инструктор продемонстрирует вам эту технику.

Процедура негативного окрашивания

1. Промаркируйте предметное стекло. Если вы работаете с бульонной культурой, поместите петлю, полную организмов, примерно на три четверти пути с левой стороны предметного стекла. Если вы работаете с чашечной культурой, добавьте каплю стерильной воды на предметное стекло и разведите свой микроорганизм в капле, не размазывая каплю.
2. Нанесите одну или две капли нигрозина на другое предметное стекло. Используйте свою стерилизованную петлю, чтобы собрать петлю, полную нигрозина. Аккуратно смешайте его с каплей клеток, не слишком сильно размазывая каплю.

3. Держите правый конец ползуна правой рукой; левой рукой сделайте еще один слайд под углом 45° или меньше к первому слайду, сразу за каплей нигрозина/клеток.
4. Скользите наклонным предметным стеклом назад по поверхности первого предметного стекла, пока оно не коснется капли нигрозина и клеток. Подождите, пока капиллярное действие не потянет жидкость вдоль передней кромки наклонного предметного стекла.
5. Протолкните угловой слайд по поверхности плоского слайда. Большая часть нигрозина должна оставаться на исходном месте. Выбросьте предметное стекло в ведро с дезинфицирующим средством.
6. Отложите окрашенное предметное стекло, чтобы оно высохло на воздухе, прежде чем исследовать его в иммерсионном масле. Не забудьте начать изучение вашего слайда в области с самым бледным серым фоном.
7. Запишите свои наблюдения в журнал лабораторных работ.
8. Выбросьте использованное окрашенное предметное стекло в ведро с дезинфицирующим средством.

Специальное примечание

Нигрозин очень легко снимается с предметного стекла и попадает на иммерсионный объектив. Обязательно тщательно очистите масляную линзу, когда закончите. Затем снова очистите. Как только он высохнет на линзе, его будет очень трудно удалить, и это ухудшит вашу способность (и других микро-студентов, использующих этот прицел) четко видеть вне линзы.

Окраска по Граму (отрицательная)

Окраска по Граму

Окраска по Граму является наиболее распространенным дифференциальным окрашиванием, используемым в микробиологии. Дифференциальные пятна используют более одного красителя. Уникальные клеточные компоненты бактерий определяют, как они будут реагировать на различные красители. Процедура окрашивания по Граму практически не изменилась с тех пор, как она была впервые разработана в 1884 году. Почти все бактерии можно разделить на две группы: грамотрицательные и грамположительные. Некоторые бактерии грамвариабельны. Trichomonas , Strongyloides , некоторые грибы и некоторые цисты простейших также имеют реакцию Грама. Очень мелкие бактерии или бактерии без клеточной стенки, такие как Treponema , Mycoplasma , Chlamydia или Rickettsia , не имеют реакции Грама. Характеристика любых новых бактерий должна включать их реакцию Грама.

Обычно дифференциальное окрашивание состоит из четырех компонентов; первичное пятно, протрава, фиксирующая пятно, обесцвечивающий агент для удаления основного пятна и встречное пятно. При окраске по Граму основной окраской является кристаллический фиолетовый. Это придает клетке интенсивный фиолетовый цвет. Морилка, йод, образует комплекс с кристаллическим фиолетовым внутри клеточной стенки. Затем клетку промывают либо обесцвечивателем Грама, либо 95% этанол. Грамположительные клетки сохранят красящий комплекс и останутся фиолетовыми. Краситель вымывается из грамотрицательных клеток. Встречный краситель, сафранин, используется для окрашивания клеток, которые потеряли первичное окрашивание, иначе они остались бы бесцветными, и вы не смогли бы их увидеть.

Большой комплекс йод-кристаллический фиолетовый сохраняется в клеточных стенках грамположительных клеток из-за молекулярной структуры многих слоев пептидогликана в клеточной стенке. Там много сшитых тейхоевых кислот и комплекс йода с красителем физически не может выйти. В мембране также меньше липидов, и обесцвечивающий агент также не может добраться до нее. Грамотрицательные клетки имеют внешнюю мембрану и только один слой пептидогликана с большим количеством липидов. Краситель кристаллический фиолетовый легко вымывается.

Общие положения

Точность окрашивания по Граму зависит от целостности клеточной стенки бактерий. Есть множество вещей, которые могут влиять на целостность клеточной стенки; старые клетки (т. е. культуры старше 24 часов), образец получен от кого-то, кто лечился антибиотиками, нацеленными на эту клеточную стенку, такими как пенициллин, с клетками грубо обращались или вы их исправили при нагревании. В этих условиях грамположительные клетки становятся грамотрицательными. Если обесцвечивать слишком долго, грамположительные клетки будут выглядеть как грамотрицательные. И наоборот, если вы недостаточно обесцвечиваете, грамотрицательные клетки будут выглядеть как грамположительные. Единственный способ, которым вы можете доверять своим результатам, — это всегда запускать известные грамположительные и известные грамотрицательные образцы на одном и том же предметном стекле. Если они окрашиваются, как предсказано, вы можете быть уверены, что результат вашего неизвестного образца надежен.

Для правильного окрашивания по Граму требуется практика. Не рассчитывайте получить хорошее окрашивание по Граму с первой попытки. Рекомендуется придерживать предметное стекло прищепкой; ваши перчатки станут довольно психоделическими, как и все, к чему вы прикоснетесь!

Процедура окрашивания по Граму

1. Промаркируйте предметное стекло. Подготовьте свои мазки на предметном стекле с отрицательным граммом слева, вашим неизвестным в середине и положительным граммом справа.
   
   • Не забудьте смазать предметное стекло метанолом!
2. Положив предметное стекло на штатив для окрашивания, покройте мазки кристаллическим фиолетовым на 1 минуту.
   
   • Используйте столько красителя, чтобы полностью покрыть мазок, но не настолько, чтобы он стекал или капал с предметного стекла.
3. Наклоните предметное стекло, вылейте кристаллический фиолетовый и быстро промойте водой из промывочной бутылки.
   
   • Не распыляйте непосредственно на мазки, иначе они смоются.
4. Залейте предметное стекло йодной протравой на 1 минуту.
5. Наклоните предметное стекло, слейте излишки йода и осторожно обесцвечивайте с помощью обесцвечивателя Грама, пока он не станет прозрачным.
   
   • Это сложная часть!
6. Наклоните предметное стекло на несколько бумажных полотенец, чтобы удалить излишки обесцвечивающего средства.
7. Залейте предметное стекло сафранином на 1 минуту.
8. Наклоните предметное стекло, чтобы слить излишки сафранина, и осторожно промойте водой, пока она не станет прозрачной.
9. Дать предметному стеклу высохнуть на воздухе
10. Наблюдайте при погружении в масло.
    • Грамположительный контроль должен быть фиолетовым, а Грамотрицательный контроль должен быть розовым.
11. Выбросьте использованный слайд в ведро с дезинфицирующим средством.

Капсульная окраска (Klebsiella)

Капсульная окраска Конго Красная

Капсульная окраска Конго Красная представляет собой модификацию отрицательного окрашивания на нигрозин, которое вы, возможно, делали ранее. Бактерии поглощают краситель конго красный, а затем фон окрашивают кислым красителем фуксином. Капсула или слои слизи, сильно гидратированные полимеры, исключают оба красителя. Фон будет синим, бактериальные клетки — розовыми, а прозрачные ореолы — это капсулы.

Клинически капсулы некоторых высокопатогенных бактерий (например, пневмококков, Haemophilis influenzae и менингококков) можно отличить с помощью антисывороток, специфичных для этого типа капсул. Бактерии суспендируют в антисыворотке, а затем смешивают с метиленовым синим. В процедуре окрашивания антисывороткой бактерии будут казаться синими, окруженными прозрачным ореолом, а затем окруженными тонкой синей линией в том месте, где антисыворотка прикрепилась к капсуле.

Материалы

• Краситель конго красный
• Кислотный краситель фуксина
• Кислый спирт
• Klebsiella pneumoniae культура
• Enterobacter aerogenes культура

Конго Красный Капсула Окрашивание Процедура

1. Поместите полную петлю Конго Красный на предметное стекло
2. Смешайте небольшое количество вашего организма с каплей конго красного.
   
   • Хорошо распределите суспензию организма/красителя на предметном стекле
3. Дайте предметному стеклу полностью высохнуть на воздухе.
   
   • Метанол не исправить!
4. Закрепите высохшее предметное стекло кислым спиртом на 15 секунд.
5. Промойте дистиллированной водой и покройте предметное стекло кислотным фуксином на 1-5 минут.
6. Промойте водой и дайте высохнуть на воздухе.
7. Осмотрите предметное стекло под масляной иммерсией.
   
   • Клетки окрашиваются в красный/розовый цвет, а капсулы выглядят как бесцветные ореолы на темно-синем фоне.

Окраска эндоспор Вирца

Образование эндоспор характерно для Clostridum и Bacillus spp. Способность концентрироваться и покрывать свою протоплазму позволяет им выживать в неблагоприятных условиях окружающей среды, с которыми они сталкиваются в своей почвенной среде обитания. Это также позволяет спорам противостоять окрашиванию. «Живые» организмы легко визуализируются с помощью простых окрасок и окрасок по Граму.

Эндоспоры обычно обладают высокой преломляющей способностью, падающий на них свет отклоняется. много видов Bacillus имеют тельца включения, обладающие высокой преломляющей способностью. Эти тельца включения могут выглядеть как эндоспоры при обычном окрашивании. Присутствие эндоспор должно быть подтверждено окрашиванием, специфичным для эндоспор. Наличие, характерная форма и положение эндоспор требуют специальных процедур для проникновения через оболочку эндоспор. Большинство окрашиваний эндоспор включают нагревание предметных стекол, при этом они постоянно остаются влажными красителем. Хотя он быстрее, он производит летучие химические вещества и представляет собой просто большой беспорядок. Те же результаты можно получить, оставив краситель на предметном стекле на 30 минут. Рекомендуется сначала начать с этого слайда и работать над другим пятном, пока вы ждете, пока краситель проникнет в эндоспору.

Общие соображения

Вы будете использовать видов Bacillus для окрашивания эндоспор. Форма и положение спор B. cereus очень похожи на споры B. anthracis . Bacillus не начинает образовывать споры, пока не закончится пища. Если культуры слишком молодые, вы в основном увидите только розовые палочки бактерий. Если культуры слишком старые, вы в основном увидите только маленькие зеленые овалы эндоспор. В идеале вы должны увидеть зеленые овальные тела эндоспор, окруженные розовой вегетативной бактериальной клеткой. Для достижения наилучших результатов выберите образец из середины колонии с помощью прямой инокуляционной иглы. Край колонии все еще активно растет и будет иметь мало эндоспор.

Материалы

• Малахитовый зеленый краситель (5%)
• Сафранин (0,25%) — встречная окраска
• Bacillus spp. пластина

Процедура окрашивания эндоспор Вирца

1. Сделайте мазок на Bacillus и метаноловый фиксаж.
2. Залейте мазок красителем малахитовой зелени.
3. Оставьте пятно минимум на 30 минут .
   
   • Добавьте больше морилки, если она начинает высыхать.
4. Промойте предметное стекло дистиллированной водой.
5. Залейте предметное стекло сафранином (0,25%) на 1–5 минут.
6. Промойте предметное стекло дистиллированной водой и дайте высохнуть на воздухе.
7. Наблюдайте при погружении в масло.
   
   • Эндоспоры цвета морской волны, бактериальные клетки розовые.

Методы окрашивания в замороженном отделе: передовой лабораторный опыт ал Профессор, заместитель заведующего кафедрой клинической службы Патология и лабораторная медицина, Калифорнийский университет в Дэвисе,

Введение

Окрашивание тканей во время замороженных срезов является одним из наиболее важных шагов в постановке точного патологоанатомического диагноза. Визуализация и различение микроскопических деталей может стать трудным, если окрашивание выполнено неправильно. Здесь мы рассмотрим два распространенных метода окрашивания (H&E, толуидиновый синий), используемых во время замороженных срезов, сравним их преимущества и недостатки, а также изложим лучшие лабораторные методы достижения оптимального результата окрашивания.

H&E

H&E является наиболее часто используемым из всех различных методов окрашивания, доступных для замороженных срезов. H&E прост в использовании, недорог и надежен. Двумя основными компонентами красителей являются гематоксилин и эозин.

Гематоксилин — это натуральный краситель, полученный из кедрового дерева Haematoxylon campechianum, произрастающего в мексиканском штате Кампече. Это основной краситель, который окрашивает кислые компоненты клетки, такие как нуклеиновые кислоты, гликозаминогликаны и кислые гликопротеины, в сине-фиолетовый оттенок. ^1,2,3 Эозин представляет собой кислый краситель и служит отличным контрастным красителем для гематоксилина, нацеленного на цитоплазму клеток, особенно на митохондрии, секреторные гранулы и коллаген. ³ Придает разные оттенки красного и розового цвета цитоплазме разных типов клеток и разных типов соединительных тканей. ⁴

ГЭ можно проводить двумя разными методами: прогрессивным и регрессивным. При прогрессивном методе ткань сначала окрашивают раствором гематоксилина, который содержит избыток солей алюминия или кислоты, повышающей сродство к ядрам. ⁵ Перед нанесением контрастного красителя следует промывание водой. Изменение цвета обусловлено избирательным сродством тканевых компонентов к гематоксилину. При регрессивном методе начальным этапом является окраска среза ткани нейтральным раствором гематоксилина. Затем кислый спирт используется для удаления избытка красителя, а затем щелочной раствор для получения нейтрализованного среза ткани. Интенсивность окрашивания контролируют визуальным осмотром под микроскопом. Прогрессивный метод дает более воспроизводимые результаты, а регрессивный метод предлагает более точную степень дифференциации. ^6,7

Преимущества : H&E дает превосходную морфологию, обеспечивая отличный контраст между клеточными компонентами. ⁵ H&E обеспечивает лучшую визуализацию некроза отдельных клеток, кератинизации и кератиновых жемчужин, которые являются частыми гистологическими находками при хорошо дифференцированной плоскоклеточной карциноме. H&E обеспечивает стабильность окрашенных тканей в течение многих лет без выцветания. Окрашивание H&E также совместимо в сочетании с различными окислителями, протравами и дифференцирующими агентами. ⁸ H&E надежен и прост в эксплуатации.

Ограничения : Одним из основных ограничений H&E является продолжительность процедуры окрашивания. Подготовка одного слайда может занять от 3 до 5 минут, в зависимости от протокола практики. Из-за количества используемых красителей выполнение H&E во время замороженного среза иногда может стать сложной задачей, особенно когда одновременно обрабатывается несколько частей или срезов. H&E также плохо окрашивает эластичный материал, ретикулярные волокна, базальные мембраны и липиды. Он дает лишь ограниченное представление о специфической биохимической природе ткани, особенно о кислотных и основных компонентах. ⁹

Толуидиновый синий

Толоний хлорид, также известный как толуидиновый синий (ТБ), представляет собой катионный (основной) тиазиновый метахроматический краситель, обладающий высоким сродством к кислым компонентам тканей и окрашивающий нуклеиновые кислоты в синий цвет, а полисахариды — в пурпурный. ¹⁰ Когда он связывается с гликозаминогликанами, он дает красновато-фиолетовое окрашивание, называемое метахромазией. ¹¹ Это свойство особенно полезно в хирургии Мооса по поводу базальноклеточной карциномы (БКК), поскольку контраст синих агрегатов БКК с красновато-фиолетовой метахромазией гликозаминогликанов в окружающей строме помогает очертить очень маленькие гнезда или несколько скоплений опухолевых клеток из придаточные структуры.

Преимущества : Окрашивание толуидиновым синим быстрее и проще, чем H&E, и не требует контрастного окрашивания. ¹¹ TB является надежным красителем и требует только одного основного красителя, в отличие от H&E. Минимизация времени окрашивания сокращает время ожидания пациента, облегчает поток пациентов и высвобождает персонал для выполнения других задач. ¹² Метахромазия при базально-клеточном раке и микрокистозной карциноме придатков (MAC) может помочь в обнаружении небольшого количества инфильтрирующих опухолевых клеток, которые иначе можно было бы пропустить. ^13,14 Тучные клетки и мукополисахариды в строме, окружающей БКК, могут быть выделены пурпурным оттенком, что побуждает к тщательному поиску остаточной опухоли. Тучные клетки имеют ярко-фиолетовые метахроматические гранулы на ТБ и в изобилии встречаются в строме БКК. Обильные тучные клетки могут свидетельствовать об остаточной опухоли. ⁸

Ограничения : Ядерная детализация хуже по сравнению с H&E. ¹¹ Многие патологоанатомы/хирурги Мооса не обучены работе с ТБ, поэтому поначалу им может быть трудно использовать ТБ. Им может потребоваться некоторое время, чтобы ознакомиться с характером окрашивания туберкулеза. ⁸ Как и в случае с H&E, сложно идентифицировать эластический материал, ретикулярные волокна, нервные волокна и жир.

Передовой лабораторный опыт

Каким бы ни был предпочтительный метод окрашивания замороженных срезов, следующие общие передовые лабораторные методы помогут обеспечить оптимальный результат окрашивания.

• Носите соответствующие средства индивидуальной защиты, чтобы избежать травм и впитывания через кожу.
• Оптимальное окрашивание достигается при толщине срезов 5–6 мкм.
• Не допускайте высыхания замороженных срезов на воздухе во время процедуры окрашивания для лучшего сохранения морфологии ткани.
• Осушайте слайды после каждого шага, чтобы избежать травм и впитывания через кожу.
• Регулярно меняйте растворы для окрашивания в соответствии с принятым лабораторным протоколом. Необходимо учитывать количество окрашенных предметных стекол, а также время их использования.
• Храните химикаты в прохладном, сухом, хорошо проветриваемом помещении, а легковоспламеняющиеся вещества в специальном шкафу или комнате.
• Обеспечьте достаточную вентиляцию и регулярно проверяйте вытяжные шкафы, которые могут свести к минимуму количество вдыхаемых химических паров.
• Контроль качества следует проводить ежедневно, прежде чем приступить к работе с образцами пациентов.

Общие проблемы при быстром окрашивании гематоксилином

1. Слабое окрашивание гематоксилином:
   Из-за автолиза или плохой фиксации, чрезмерной декальцинации, недостаточного времени окрашивания, чрезмерного обесцвечивания, слабого гематоксилина из-за переноса, загрязнений, тонких срезов и неадекватного удаления спирта или недостаточное предварительное ополаскивание водой перед окрашиванием гематоксилином
2. Чрезмерное окрашивание гематоксилином:
   Из-за высыхания ткани, чрезмерного времени окрашивания, слишком слабого или недостаточного времени обесцвечивания, толстого среза.
3. Слабое окрашивание эозином:
   Из-за слишком высокого pH эозина, загрязнения спиртовой промывки, порчи эозина из-за чрезмерного переноса, тонких срезов, недостаточного времени окрашивания, чрезмерной дифференциации последующим 95% спиртом.
4. Чрезмерное окрашивание эозином:
   Из-за более сильного раствора красителя (может быть из-за чрезмерного испарения), использования изопропилового спирта в качестве ополаскивателя, толстых срезов, чрезмерного времени окрашивания
5. Водяные шарики или белая дымка под покровным стеклом:
   Из-за неполного обезвоживания среза, образованного смесью воды и очищающего вещества.
6. Эозиновое кровотечение из среза ткани:
   Из-за недостаточного выведения спирта, который остается в срезе ткани и вызывает кровотечение.

Метод экспресс-окрашивания H&E

1. 95% этиловый спирт (10 погружений)
2. Формалин 10%, фосфатный буфер (10 капель)
3. Дистиллированная вода (10 капель)
4. Окрашивание гематоксилином, модификация Харриса (30 секунд)
5. Дистиллированная вода (10 растворов)
6. Дистиллированная вода (10 растворов)
7. Спирт этиловый 95% (10 растворов)
8. Эозин Y (15 секунд)
9. Спирт этиловый 95% (10 растворов)
10. Спирт этиловый 95% (10 растворов)
11. 100% этиловый спирт (10 растворов)
12. 100% этиловый спирт (10 растворов)
13. Очиститель (10 капель)
14. Очиститель (10 капель)
15. Покровное стекло с совместимой заливочной средой

Общие проблемы с толуидиновым синим

1. Слабое окрашивание толуидиновым синим:
   Из-за автолиза или плохой фиксации, чрезмерной декальцинации, недостаточного времени окрашивания, чрезмерного обесцвечивания/промывки водой, слабого раствора из-за переноса воды, загрязнений, разбавления разделы
2. Чрезмерное окрашивание толуидиновым синим:
   Из-за высыхания ткани, чрезмерного времени окрашивания, недостаточного обесцвечивания/промывания водой, толстые срезы
3. Капли воды или белая дымка под покровным стеклом:
   Из-за неполного обезвоживания среза, образованного смесью воды и очищающего агента

Образец Метод окрашивания толуидиновым синим

1. Спиртовой формалин (10 погружений)
2. Водопроводная вода (10 капель)
3. Водопроводная вода (10 капель)
4. 1% Т-синий (40 секунд)
5. Водопроводная вода (10 капель)
6. 70% этанол (10 растворов)
7. 95% этанол (10 растворов)
8. 100% этанол (10 растворов)
9. 100% этанол (10 растворов)
10. Очиститель (10 капель)
11. Очиститель (10 капель)
12. Покровное стекло с совместимой заливочной средой

Заключение

Предпочтение методу окрашивания в замороженных срезах обычно основывается на индивидуальном обучении или личном опыте. Следует учитывать преимущества и ограничения каждого метода, независимо от того, предпочитаете ли вы H&E или ТБ. Важно понимать, что характеристики окрашивания зависят от техники, марки раствора/красителя и опыта. Четкое понимание принципов методов окрашивания H&E или TB имеет решающее значение для устранения проблем. Окрашивание тканей должно быть воспроизводимым и надежным. Отличная визуализация и различение гистологических деталей срезов тканей имеют решающее значение для быстрой и точной патологической диагностики во время замороженных срезов. Наконец, другие красители, такие как масляный красный O для жира, гематоксилин и периодическая кислота Шиффа (PAS) для выделения гликогена и мукопротеинов, а также некоторые иммуногистохимические красители также доступны во время замороженных срезов, и их следует учитывать, если они доступны.

Ссылки

1. Bancroft JD, Gamble M, редакторы. Теория и практика гистологических методов. 6-е изд. Нью-Йорк: Черчилль Ливингстон; 2008.
2. Бэнкрофт Дж. Д., Стивенс А. Гистопатологические пятна и их диагностическое использование. Нью-Йорк: Черчилль Ливингстон; 1975.
3. Junqueira LC, Carneiro J. Основная гистология. 11-е изд. Нью-Йорк: McGraw Hill, Inc.; 2005.
4. Росс М.Х., Войцех П. Гистология: текст и атлас. 5-е изд. Балтимор: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс; 2006.
5. Ларсон К., Хо Х.Х., Анумолу П.Л., Чен Т.М. Окрашивание тканей гематоксилином и эозином в микрографической хирургии Мооса: обзор. Дерматол Хирург. 2011 авг; 37 (8): 1089-99. doi: 10.1111/j.1524-4725.2011.02051.x. Epub 2011 2 июня. Обзор. PubMed PMID: 21635628.
6. Прис А. Руководство по гистологическим методам. 3-е изд. Бостон: Литтл, Браун и компания; 1972.
7. Луна Л., редактор. Руководство по методам гистологического окрашивания Института патологии Вооруженных Сил. 3-е изд. Нью-Йорк: McGraw-Hill, Inc.; 1968.
8. Хамфрис Т.Р., Немет А., МакКреви С., Баер С.К., Голдберг Л.Х. Пилотное исследование, сравнивающее окрашивание толуидиновым синим и гематоксилином и эозином базальноклеточной и плоскоклеточной карциномы во время операции Мооса. Дерматол Хирург. 1996 авг; 22 (8): 693-7. PubMed PMID: 8780761.
9. Виттекинд Д. Традиционное окрашивание для рутинной диагностики патологии, включая роль дубильной кислоты. 1. Ценность и ограничения окраски гематоксилин-эозином. Biotech Histochem 2003;78:261-70.
10. Шридхаран, Г.; Шанкар, А.А. (2012). Толуидиновый синий: обзор его химического состава и клинического применения. J Оральный челюстно-лицевой патол. 16: 251–5. дои: 10.4103/0973-029Х.99081.
11. Аслам А., Ааси С.З. Обработка замороженных срезов тканей в хирургии Мооса. Дерматол Хирург. 2019 Декабрь;45 Дополнение 2:S57-S69. doi: 10.1097/DSS.0000000000002260. PubMed PMID: 31764292.
12. Тодд М.М., Ли Дж.В., Маркс В.Дж. Быстрое окрашивание толуидиновым синим для микрографической хирургии Мооса. Дерматол Хирург. 2005 г., 31 февраля (2): 244-5. PubMed PMID: 15762224.
13. Техрани Х., Мэй К., Моррис А., Мотли Р. Улучшает ли двойное использование толуидинового синего и окрашивание гематоксилином и эозином обнаружение базально-клеточного рака стажерами хирургии Мооса? Дерматол Хирург.