Окрашивание многоцветное: Многоцветное окрашивание волос от 1800 руб. в салонах «Kawaicat»

Многоцветное окрашивание волос от 1800 руб. в салонах «Kawaicat»

Отзывы, всего 974

Екатерина,

Москва

14 января впервые воспользовалась услугами салона Kawaicat в Москве и осталась очень довольна! Приятная обстановка, доброжелательный персонал!) Окрашивание делала мастер Эллада. Хотелось бы отметить то, что мастера советуют, как лучше и какое лучше сделать окрашивание, а не «тупо делают то, что хочет клиент», не взирая на последствия. Это, я считаю, очень важно!☝ Так что отдельное Вам за это Спасибо!) ❤
Окрашиванием ооочень довольна! Никак не могу нарадоваться))
Все друзья в восторге, как и я сама!)
Спасибо Большое Элладе за проделанную работу!

Катя,

Москва

Покрасилась ещё во вторник, но руки до отзыва дошли только сейчас.
хочу сказать огромное спасибо мастеру Мадине и всему салону)
Я очень довольна своим окрашиванием, никогда ещё моя причёска не доставляла мне столько радости и уверенности в себе, да и комплиментов стало больше))
У вас очень уютно, мастера приятные, чай вкусный, короче говоря все идеально )) обязательно приду к вам ещё, так что ждите в гости

Анна,

Санкт-Петербург

Спасибо огромное салону Kawaicat на Пушкинской и особенно мастеру Насте за чудесное преображение! Настя супер-профи, все поняла про желаемую стрижку без лишних слов, сделала выше всяких похвал, потратив на меня половину своего рабочего дня! А цвет вышел красивый и необычный, никогда бы не подумала, что мои темные волосы могут приобрести такой волшебный светлый оттенок за один раз. Также было очень приятно, что по цене вышло даже дешевле, чем прикидывала администратор. Отдельно порадовала классная музыка, которая не давала соскучиться, наблюдать за работой других мастеров тоже было здорово, все такие душевные, талантливые и профессиональные ребята! И конечно спасибо за чудный кофе в мимимишной чашке))) В следующий раз — только к вам!))

Елена,

Москва

Была третий раз в салоне. И я жутко недовольна! Чем? А тем что время пролетело с такой бешанной скоростью, что сложилось ощущение, что была там минут 10 всего!

Популярность окрашивания волос в несколько ярких оттенков сейчас растет во всем мире. Она обусловлена не только веяниями моды. Такой прием гарантирует образу неординарность, владелице многоцветной, радужной прически гарантируется повышенное внимание. Выполнить качественно это сложное окрашивание могут только опытные профессионалы.

Частый запрос в нашем салоне это радужное окрашивание, то есть 7-ми цветное окрашивание, но бывают и 2х и 12 цветные — мы делаем любые возможные варианты цветов и их переходы. Стоимость при этом насчитывается как окрашивание в 1 тон +20% если использовано 2-5 цветов и +40% если использовано 6 и более цветов. Стоимость берется за объем работ по окрашиванию и отдельно считаются расходные материалы по граммам — то есть мы не считаем Вам сразу 2-12 разных тюбиков красителя — мы считаем лишь те граммы, которые ушли!!! Для многоцветных окрашиваний это огромная экономия!

Стоимость:

Записаться

Мы перезвоним Вам в ближайшее время и проконсультируем по всем интересующим Вас вопросам.

Омбре с редким, но красивым сочетанием цветов

Мама и дочка пришли к нам вместе на яркое окрашивание

Окрашивание сплеш лайтс

Кто сказал, что мужчинам нельзя окрашивать волосы?

Яркие акценты на белом фоне. Кстати, белый цвет мы также получаем с помощью нейтрализации желтого пигмента на красителе Антоцианин

Плавная растяжка от своего темного цвета к фиолетовому

Скрытое окрашивание в несколько цветов

Скрытое многоцветное яркое окрашивание

Окрашивание на красителе антоцианин в технике шатуш

Идеально ровное полотно. Такого невозможно добиться в домашних условиях

Светло розовые оттенки Anthocyanin на длинных волосах

Вольфкат стрижка дополненная многоцветным окрашиванием

Пастельное окрашивание волос с растяжкой цвета

Цветное окрашивание Санкт-Петербург

Вид цветного окрашивание на прямых волосах и в укладке

Радужное окрашивание

Многоцветное окрашивание на длинные волосы

Желтые волосы с растяжкой цвета

Довольные клиенты Kawaicat

Нежное пастельное окрашивание

Цветное окрашивание на очень длинные волосы

Потайное окрашивание

Яркое окрашивание глитч

Яркое солнечное окрашивание на красителе Антоцианин

Цветное окрашивание и стрижка боб

зеленые волосы

креативное яркое окрашивание

пастельное цветное окрашивание

мелкий глитч сложное окрашивание волос

серые волосы и цветные пряди

двухцветное окрашивание

трафаретное окрашивание

окрашивание на красителе Антоцианин самое стойкое

омбре на красителе Антоцианин

окрашивание не от корней

цветное мелирование

цветные пряди

окрашивание красителем Антоцианин

переход цвета растяжка

радужное окрашивание москва

рисунок на волосах

разноцветное окрашивание Санкт-Петербург

цветной шатуш

Цветные ультракороткие волосы выбривание

Окрашивание глитч

Многоцветное окрашивание

Фиолетовые волосы

Креативное окрашивание волос и стрижка

цветное мелирование

окрашивание волос в несколько цветов

Окрашивание с цветными кончиками волос

Зеленые длинные волосы.

Яркое омбре на антоцианине. Оранжевые волосы

Ровное длинное полотно цвета — очень сложная работа

В этом видео мы делаем волосы нашей любимой модели, доверяющей свои волосы Kawaicat и красителю Антоцианин. Вместе мы уже попробовали практически все варианты цветов и оттенков — благо Антоцианин не портит волосы и позволяет при смывке менять цвет!

Пиксельное окрашивание

Смотреть все фото

Красивое многоцветное окрашивание может выполняться в различных техниках. Радужные оттенки могут располагаться от середины или от корней горизонтальными полосами. Яркие цвета могут украшать отдельные пряди или участки. Выполняется скрытое окрашивание, которое в офисе можно спрятать, а в ночной жизни, на вечеринке продемонстрировать во всей красе. Нет ограничений по выбору тонов и их количеству.

Лишь на первый взгляд создание эксклюзивной многоцветной прически может показаться несложной процедурой. Необходимы профессионализм и опыт для получения должного результата окрашивания. Обращение в наш салон поможет вам сменить имидж грамотно, добиться желаемого эффекта. Гарантиями являются:

• профессиональная консультация по выбору техники, оттенков;
• точное соблюдение технологий окрашивания;
• наличие качественного, надежного расходного материала;
• большой ассортимент красителей.

Наши мастера обладают большим практическим опытом, отменным вкусом. Для каждой леди они найдут лучший вариант модной многоцветной прически. Красители нам поставляют известные мировые бренды. Популярность продукции является подтверждением ее качества.

Колорирование волос (сложное, многоцветное окрашивание) в Курске

Колорирование волос — это профессиональная технология окрашивания, предполагающая одновременное применение нескольких оттенков краски. Колорирование визуально увеличивает объем прически, подчеркивает эффект стильной и простой стрижки, оживляет естественный цвет шевелюры, придает ей красивую оттеночную гамму цветов. Если Вы остановили свой выбор на этой технике окрашивания, можете быть уверены, что ваш образ будет собирать восхищенные взгляды.

Сколько стоит колорирование?

Освежите свой образ в салоне красоты «Beauty-nextstep»! Мы предлагаем модную технику окрашивания, которая никогда не выйдет из моды — колорирование. Яркие пряди невообразимых оттенков, уникальные сочетания и глубина цвета — все это могут осуществить наши специалисты!

Цена на колорирование волос зависит от их длины, исходного цвета и техники выполнения: двухцветное окрашивание волос, тип расположения краски и др. Чем темнее и длиннее локоны, тем дороже и сложнее процедура. 

Варианты колорирования

Колорирование — это возможность реализовать самые нестандартные и смелые идеи в создании уникального стиля. Такой стиль окрашивания имеет множество техник выполнения. Сложное колорирование волос может осуществляться небольшими или широкими прядями, затрагивать все локоны или только определенную часть, использовать один цвет или комбинации контрастных оттенков (например, покраска волос в три цвета) и т. д. Чем тоньше и незаметнее переход от одного оттенка к другому, тем покраска выглядит качественнее и естественнее. Колорирование волос средней длины и длинных часто применяется с яркими оттенками и пользуется большим спросом среди молодых девушек. Колорирование на короткие волосы также популярно, но в качестве основного цвета часто используются естественные тона.

В нашем салоне осуществляется колорирование волос:

• Продольное (пряди окрашиваются по всей длине) и поперечное. Чаше применимо такое колорирование на среднюю длину волос, а также колорирование на светлые волосы. Данная техника может называться как двойное окрашивание волос.

• Одноцветное (с использованием оттенков одной цветовой гаммы) и многоцветное окрашивание (сложное окрашивание волос). Применимо на всех видах причесок, но больше всего востребовано окрашивание волос на каре и на волосы средней длины;

• С полным закрашиванием натурального цвета и с нетронутыми прядями.Чаше применимо такое колорирование на длинные волосы.

• По всей длине и окрашивание на одном участке (например, челки).

Рекомендации по подбору цвета

1. Ваша цель сделать прическу объемнее? Выбирайте одноцветное колорирование. При помощи разных оттенков наши мастера смогут добиться ощущения невероятного объема и красоты;

2. Если у вас светлые локоны, колорирование на днинные волосы (короткие/средней длины) будет идеально смотреться, если применить сложное окрашивание для блондинок с использованием платиновых, золотистых или ярких контрастных цветов (голубой, сиреневый, розовый). Лучше использовать двойное окрашивание волос: двухцветное окрашивание волос смотрится более естественно и проще выполнимо;

3. Если у вас темные пряди, вам доступны абсолютно все оттенки и цвета радуги. Но нужно быть готовой к тому, что скорее всего слишком темные пряди придется осветлять в парикмахерской. 

Особенности колорирования волос

Окрашивание волос в два цвета менее сложный процесс, поэтому более популярен. Окрашивание волос в три цвета также сегодня в моде, но оно требует особого мастерства и времени, чтобы свести риск повдеждений к минимуму. 

При это особенности техники выполнения зависят как от длины, так и от исходного цвета локонов. Колорирование рыжим цветом менее востребовано, хотя результаты такой процедуры всегда впечатляющие. Сложное окрашивание рыжих волос придает прическе легкий шарм и изыск, делает ее более «свежей», «живой». Колорирование на русые волосы и колорирование на темные волосы позволяет по-новому преподнести себя: для молодых девушек — это всевозмодные яркие пряди (не только естественных цветов, но и «кричащие»), для более взрослого поколения — это двухцветное колорирование с незаметными переходами, чтобы сохранить строгий вид для официального общения и при этом выглядеть модно, стильно, элегантно.

Примеры колорирования волос разной длины

Колорирование на длинные волосы

Колорирование на средние волосы

Колорирование на короткие волосы

Сложное окрашивание волос на короткие волосы или сложное окрашивание на средние волосы обновит ваш образ, сделает вас неповторимой! 

Руководство по многоцветному окрашиванию

Руководство по многоцветному окрашиванию

США

Благодаря широкому выбору антител, флуорофоров и инструментов, доступных для многоцветной проточной цитометрии, оптимизация многоцветных экспериментов может сбивать с толку и разочаровывать. Используйте наше руководство по многоцветному окрашиванию, чтобы помочь вам в разработке и оптимизации ваших экспериментов по проточной цитометрии. Освойте пять аспектов Руководства по окрашиванию, и вы будете на пути к легендарным открытиям. Когда вы будете готовы к поиску антител, перейдите к селектору многоцветной панели.

• Яркость флуорофора
• Ваш инструмент
• Вебинары
• Экспрессия общих маркеров
• Правила
• Другие источники

Яркость флуорофора

Ваш инструмент

Вебинары

Экспрессия общих маркеров

Правила

Другие источники

Важно понимать свойства и возможности каждого флуорофора, который вы можете использовать для многоцветной проточной цитометрии. Одним из таких важных свойств является относительная яркость флуорофора при конъюгации с антителами. Мы предоставляем эти значения с точки зрения индекса относительной яркости. Значения индекса яркости не являются абсолютными и могут варьироваться в зависимости от антитела, антигена, прибора и его конфигурации, протокола окрашивания, типа клеток и других факторов. Индекс яркости предоставляется в качестве общего руководства, помогающего в построении многоцветных панелей, где 1 соответствует самому тусклому, а 5 — самому яркому. В приведенных ниже таблицах также представлены спектры излучения и важные комментарии по использованию каждого флуорофора. Исследуйте флуорофоры с помощью лазерного возбуждения на вкладках ниже. Также используйте наш анализатор спектра флуоресценции или анализатор спектра полярного сияния для сравнения и анализа данных возбуждения и эмиссии. Узнайте больше о тандемных красителях BioLegend.

• Ультрафиолет 355 нм
• Фиолетовый 405 нм
• Синий 488 нм
• Желто-зеленый 561 нм
• Красный 633 нм

Ультрафиолет 355 нм

Фиолетовый 405 нм

Синий 488 нм

Желто-зеленый 561 нм

Красный 633 нм

Ознакомьтесь с нашим полным индексом яркости

Наша служба технической поддержки готова помочь с любыми вопросами, которые могут у вас возникнуть в отношении многоцветной проточной цитометрии.

Техническая служба
Бесплатный телефон (США и Канада) 1-877-273-3103
Телефон (международный): 1-858-768-5801 
Электронная почта: Нажмите здесь

. Чтобы просмотреть полный список товарных знаков и патентов, упомянутых на этой странице, нажмите здесь.

PE/Fire™ 780 является фторсодержащим эквивалентом PE/Cyanine7. Он ограничен только использованием ASR и доступен только для клиентов из США.

Перед проведением каких-либо экспериментов по проточной цитометрии важно знать возможности вашего прибора. Вам нужно будет точно определить, какие флуорофоры вы можете или не можете использовать на доступных проточных цитометрах. Чтобы найти дополнительную информацию, воспользуйтесь нашим Руководством по приборам/Инструментом выбора флуорофора, ссылками на который приведена ниже, ознакомьтесь с руководством по эксплуатации вашего цитометра или обратитесь в местное учреждение Flow Core. Нажмите на изображение ниже, чтобы использовать руководство по приборам/инструмент выбора флуорофора.

Наша служба технической поддержки готова помочь с любыми вопросами, которые могут у вас возникнуть в отношении многоцветной проточной цитометрии.

Техническая служба
Бесплатный телефон (США и Канада) 1-877-273-3103
Телефон (международный): 1-858-768-5801 
Электронная почта: Нажмите здесь

. Чтобы просмотреть полный список товарных знаков и патентов, упомянутых на этой странице, нажмите здесь.

PE/Fire™ 780 является фторсодержащим эквивалентом PE/Cyanine7. Он ограничен только использованием ASR и доступен только для клиентов из США.

Многоцветная проточная цитометрия: флуорофоры Brilliant Violet ™ — «Multicolor Qi»

Модуляция in vivo Т -клеточная активация: 15 цветовой иммунофенотипирование, анализ цитокинов и энтибиторный перераспределение

40004. и экспрессия рецептора хемокинов человека

Наша служба технической поддержки готова помочь с любыми вопросами, которые могут у вас возникнуть в отношении многоцветной проточной цитометрии.

Техническая служба
Бесплатный телефон (США и Канада) 1-877-273-3103
Телефон (международный): 1-858-768-5801 
Электронная почта: Нажмите здесь

. Чтобы просмотреть полный список товарных знаков и патентов, упомянутых на этой странице, нажмите здесь.

PE/Fire™ 780 является фторсодержащим эквивалентом PE/Cyanine7. Он ограничен только использованием ASR и доступен только для клиентов из США.

Знание относительной экспрессии антигенных маркеров может помочь вам оптимизировать выбор флуорофоров в многоцветной проточной цитометрии. Как правило, для антигенов со слабой экспрессией выбирайте яркие флуорофоры, а для антигенов с высокой экспрессией выбирайте более тусклые флуорофоры. Эта стратегия обеспечивает более управляемую компенсацию для ваших образцов и дает вам наиболее точные данные для слабо выраженных антигенов.

Просмотр экспрессии общих поверхностных молекул на клетках крови

Наша команда технической поддержки готова помочь вам с любыми вопросами, которые могут у вас возникнуть в отношении многоцветной проточной цитометрии.

Техническая служба
Бесплатный телефон (США и Канада) 1-877-273-3103
Телефон (международный): 1-858-768-5801 
Электронная почта: Нажмите здесь

. Чтобы просмотреть полный список товарных знаков и патентов, упомянутых на этой странице, нажмите здесь.

PE/Fire™ 780 является фторсодержащим эквивалентом PE/Cyanine7. Он ограничен только использованием ASR и доступен только для клиентов из США.

При настройке многоцветной панели необходимо соблюдать несколько основных правил. Следуйте этим правилам, чтобы упорядочить и оптимизировать свои результаты.

1. Выберите самый яркий флуорофор для наименее экспрессируемого белка и самый тусклый флуорофор для наиболее экспрессируемого белка. Чтобы помочь вам, мы составили таблицу, показывающую экспрессию общих поверхностных молекул на клетках крови. Как правило, такие молекулы, как CD45, CD3, CD4 и CD8, довольно сильно экспрессируются на своих типах клеток-мишеней и могут весьма успешно использоваться с тусклыми флуорофорами.
2. Выберите флуорофоры с излучением, имеющим наименьшее спектральное перекрытие. Например, хотя спектры излучения Brilliant Violet 421™ и Pacific Blue™ не совпадают, они имеют значительное перекрытие, поэтому обычно следует избегать их совместного использования. Используйте наш Spectra Analyzer для просмотра и сравнения спектров возбуждения и излучения, просмотра лазерных линий и добавления пользовательских полосовых фильтров.
3. Используйте тандемы (PE/Cyanine5, PE/Cyanine7, APC/Cyanine7) с осторожностью, поскольку они более подвержены деградации под воздействием света или фиксации. Они необходимы для больших многоцветных панелей, поэтому используйте их с осторожностью, чтобы предотвратить воздействие света, и используйте соответствующие буферы и протоколы фиксации.
4. Избегайте кислых буферных условий с образцами, помеченными FITC, поскольку FITC чувствителен к низкому pH.
5. Избегайте подвергать окрашенные образцы воздействию яркого света, так как большинство флуорофоров восприимчивы к фотообесцвечиванию, что приводит к потере их флуоресценции. Особенно это касается тандемных красителей.
6. Избегайте инкубации клеток в фиксаторе в течение длительного периода времени, так как это может повлиять на флуоресценцию, особенно тандемных красителей.

Наша служба технической поддержки готова помочь с любыми вопросами, которые могут у вас возникнуть в отношении многоцветной проточной цитометрии.

Техническая служба
Бесплатный телефон (США и Канада) 1-877-273-3103
Телефон (международный): 1-858-768-5801 
Электронная почта: Нажмите здесь

. Чтобы просмотреть полный список товарных знаков и патентов, упомянутых на этой странице, нажмите здесь.

PE/Fire™ 780 является фторсодержащим эквивалентом PE/Cyanine7. Он ограничен только использованием ASR и доступен только для клиентов из США.

Анализатор спектров флуоресценции BioLegend полезен для анализа спектров возбуждения и испускания широко используемых флуорохромов для проточной цитометрии. Вы также можете создавать собственные полосовые фильтры, экспортировать изображения и добавлять настройки в закладки. В отличие от других инструментов спектров флуоресценции в Интернете, этот анализатор не использует Java, что позволяет ему хорошо работать на iPhone и iPad и просматривать его в стандартном веб-браузере.

 Селектор многоцветных панелей

Селектор многоцветных панелей BioLegend – это многофункциональный инструмент, разработанный для того, чтобы помочь вам найти нужные продукты для экспериментов с многоцветной проточной цитометрией. В ролях:

• Простой интерфейс для панельной конструкции
• Превью продуктов, включая данные
• Предварительный просмотр спектров излучения и примечания к флуорофорам
• Индекс яркости флуорофора
• Добавьте элементы панели прямо в корзину
• Контроль изотипа

Инструмент также предоставляет советы и рекомендации по созданию оптимизированных многоцветных панелей.

Архив Purdue

Архив электронной почты лаборатории цитометрии Университета Purdue Найдите в архиве электронной почты вопросы и обсуждения или задайте свой вопрос сообществу проточной цитометрии.

Архив цитометрии Purdue

Организации США

Медицинский колледж Альберта Эйнштейна

Медицинский колледж Карвера Университета Айовы

Международная ассоциация проточной цитометрии Великих озер

Международный центр аналитической цитологии

Лос -Аламос Национальная лаборатория

Национальная проточная цитометрия

Группа пользователей цитометрии в Новой Англии

Университет Университета университета. Центральная лаборатория

Вашингтонский университет Департамент иммунологии

Медицинский колледж Бэйлора Центр цитометрии и сортировки клеток

Общество клинической цитометрии

Онкологический центр Инграма – Университет Вандербильта

Лаборатория проточной цитометрии Дженис В. Джорджи – Калифорнийский университет в Лос-Анджелесе

Национальный институт артрита, заболеваний опорно-двигательного аппарата и кожи Floweller University Rockefeller

3 900 Ресурсный центр цитометрии

Калифорнийский университет в Беркли, Центр проточной цитометрии

Чикагский университет, Центр проточной цитометрии

Институт рака Питтсбургского университета, Центр проточной цитометрии

Association Francaise de Cytometrie

Центр проточной цитометрии в Праге

Немецкое общество проточной цитометрии

Японское общество цитометрии

Шведское общество проточной цитометрии

Университет Калгари Центр проточной цитометрии

Датское общество проточной цитометрии

Молекулярная медицина, Ирландия

Химический инженерный факультет Бирмингемского университета

Институт Уолтера и Элизы Холл, Австралия

Литература

Книги

1. Darzynkiewicz Z,Roederer M,Tanke H,eds. Цитометрия. 4-е изд. Бостон: Elesevier Academic Press; 2004. ISBN: 0125641702.
2. Darzynkiewicz Z. Проточная цитометрия. 2-е изд. Сан-Диего, Калифорния: Academic Press; 1994. ISBN: 0125641427.
3. Darzynkiewicz Z,Chrissman HA,Robinson JP,eds. Методы клеточной биологии: цитометрия. 3-е изд. Сан-Диего, Калифорния: Academic Press; 200; 63 (PT.A).
4. Givan AL. Проточная цитометрия: основные принципы. Нью-Йорк, 2-е изд. Нью-Йорк: Уайли-Лисс; 2001. ISBN0471382248.
5. Гроган В.М., Коллинз Дж.М. Руководство по методам проточной цитометрии. Нью-Йорк, Нью-Йорк: Марсель Деккер; 19890. ISBN 0824783301.
6. Нгуен Д.Т., Даймонд Л.В., Брайлан Р.С. Проточная цитометрия в гематопатологии: визуальный подход к анализу и интерпретации данных. Тотова, Нью-Джерси: Human Press; 2002. ISBN 1588292126.
7. Нуньес Р. Проточная цитометрия для ученых-исследователей: принципы и приложения. Норвич, Великобритания; Научная пресса Горизонта; 2001. ISBN 1898486263.
8. Райли Р. С. Клинические применения проточной цитометрии. Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: Игаку-Сёин; 1993. ISBN 0896402002.
9. Шапиро Х. Практическая проточная цитометрия. 4-е изд. Нью-Йорк, Нью-Йорк: Алан Р. Лисс; 2003. ISBN 0471411256.
10. Уотсон СП. Введение в проточную цитометрию. Нью-Йорк, Нью-Йорк: Издательство Кембриджского университета; 1991. ISBN 0521380618.

Периодические издания

1. Цитометрия Часть B: Клиническая цитометрия
2. Текущие протоколы цитометрии
3. Текущие протоколы в иммунологии
4. Цитометрия Часть A
5. Журнал иммуноанализа и иммунохимии

Наша служба технической поддержки готова помочь с любыми вопросами, которые могут у вас возникнуть в отношении многоцветной проточной цитометрии.

Техническая служба
Бесплатный телефон (США и Канада) 1-877-273-3103
Телефон (международный): 1-858-768-5801 
Электронная почта: Нажмите здесь

. Чтобы просмотреть полный список товарных знаков и патентов, упомянутых на этой странице, нажмите здесь.

PE/Fire™ 780 является фторсодержащим эквивалентом PE/Cyanine7. Он ограничен только использованием ASR и доступен только для клиентов из США.

ПродуктыЗдесь

• • Продукты
  • Карьера
  • Заказ Вопросы
  • Связаться с нами
• • Веб-инструменты
  • Литература
  • Индивидуальные продукты/услуги
  • Акции
  • Блог
  • Качество
• • Техническая поддержка
  • Ресурсы поддержки
  • Заказ Вопросы
  • Найти дистрибьютора
  • Обратная связь
• • Компания
  • политика конфиденциальности
  • Условия
  • Настройки файлов cookie
  • Налоговые формы
  • Торговые марки и патенты

Протокол многоцветного иммунофлуоресцентного окрашивания: Novus Biologicals

Что такое многоцветное иммунофлуоресцентное окрашивание?

Двойное иммунофлуоресцентное окрашивание, также известное как многоцветная иммуноцитохимия (ICC) или многоцветная иммунофлуоресценция (IF), полезно для изучения распределения двух (или более) разных антигенов в одном и том же образце клеток. Многоцветный ICC/IF можно проводить либо одновременно с использованием коктейля антител, либо последовательно, зондируя один антиген за другим. Одновременное и последовательное окрашивание следуют одному и тому же основному протоколу, но существуют значительные различия в этапах блокирования и инкубации антител. Во всех протоколах многоцветного окрашивания выбор непосредственно меченых первичных или вторичных антител очень важен. При выборе цвета флуорохрома для меченых антител необходимо учитывать спектр их флуоресцентного излучения. Эффекты просачивания будут минимальными, если выбранные флуорохромы имеют незначительное спектральное перекрытие. Кроме того, рекомендуется использовать самый тусклый флуорохром для маркировки наиболее распространенного белка и наоборот. Всегда следует включать отрицательный контроль, в котором отсутствуют первичные антитела, для проверки специфичности окрашивания. Эти меры предосторожности и советы, обсуждаемые в приведенных ниже протоколах, помогут эффективно/точно обнаружить несколько белков при иммунофлуоресцентном окрашивании.

КУЛЬТУРА КЛЕТОК

1. Покройте покровные поли-L-лизином, высушите и стерилизуйте их.

Совет. Покровные стекла можно стерилизовать, погрузив их в этанол и прокалив их пламенем, или поместив их в чашки для культур тканей и подвергнув их воздействию УФ-излучения (имеется в большинстве боксов для культур тканей).

2. Посейте клетки на стерильные покровные стекла (покрытые поли-L-лизином). Некоторым типам клеток может потребоваться рост на других обработанных покровных стеклах для надлежащей адгезии. Расти клетки до полуслияния.

   Советы: В одну чашку можно засевать несколько покровных стекол, что помогает сократить количество чашек в инкубаторе. Сведите все механические манипуляции к минимуму, чтобы не ставить под угрозу качество окончательных изображений клеток. Всегда осторожно обращайтесь с клетками и покровными стеклами, никогда не допускайте их высыхания и избегайте попадания растворов непосредственно на клетки.

ФИКСАЦИЯ

1. Аспирируйте культуральную среду из чашки или удалите каждое покровное стекло при необходимости с помощью пинцета и осторожно промойте их PBS при комнатной температуре.
2. Инкубируйте покровные стекла в свежеприготовленном 4% параформальдегиде – нейтральном PBS при комнатной температуре в течение 10 минут. В качестве альтернативы клетки можно фиксировать в течение 10 минут в охлажденном метаноле (предварительно уравновешенном при -20°С) на льду.

Совет: можно протестировать и сравнить альтернативные методы фиксации, чтобы определить, какой из них лучше всего сохраняет структуру и эпитоп интересующего белка.

3. Вымойте покровные фиксатора в PBS в течение 2 минут.

ПРОНИЦАЕМОСТЬ

1. Инкубируйте покровные в 0,5% Triton X-100 в PBS при комнатной температуре в течение пяти минут. Испытайте различные детергенты (например, дигитонин, твин-20) в различных концентрациях, чтобы найти оптимальные условия, которые лучше всего сохраняют клеточную структуру и целевой белок.

Совет. При фиксации метанолом этап пермеабилизации не требуется, поскольку метанол действует как фиксатор, а также агент пермеабилизации клеток.

2. Вымойте покровные буфера permeablization путем инкубации в PBS в течение 5 минут.

БЛОКИРОВКА

1. IgG вторичного антитела могут неспецифически связываться с липкими участками клеток, что часто приводит к неспецифическому фоновому сигналу. Чтобы избежать этой проблемы, заблокируйте покровные стекла в 1-5% нормальной сыворотке, приготовленной в PBS, в течение одного часа при комнатной температуре.

Совет: Нормальный блок сыворотки должен относиться к тому же виду, у которого выработалось вторичное антитело. Например, если вы используете вторичную вакцину против кроликов, заблокируйте ее 5% нормальной козьей сывороткой.

2. Альтернативными блокирующими агентами являются 1% желатин или 1-5% BSA в PBS.

МНОГОЦВЕТНОЕ ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНТНОЕ ОКРАШИВАНИЕ

Эксперименты по многоцветному мечению лучше всего проводить путем последовательной инкубации клеток с первичными и вторичными антителами, однако это можно выполнить, используя один из следующих трех вариантов:

Вариант №1: последовательные инкубации с немечеными антителами
Этот метод полезен, когда задействованы первичные антитела от разных хозяев (например, мышиные моноклональные против антигена-X, кроличьи поликлональные против антигена Y и овечьи поликлональные против антигена Z), и антитела демонстрируют образование агрегатов при одновременном инкубировании.

1. Шаг блокировки № 1: инкубируйте клетки с блокирующим буферным раствором № 1 в течение 30 минут при комнатной температуре. Этот буферный раствор содержит 5% сыворотки того же вида, что и хозяин меченого вторичного антитела №1 (против первичного антитела №1).
2. Первичная инкубация №1: инкубируйте клетки с первичным антителом №1 в 1% БСА или 1% сыворотке во влажной камере в течение часа при комнатной температуре или в течение ночи при 4°С.
3. Декантируйте раствор антител и трижды промывайте клетки в PBS-T (по 5 минут на каждую промывку).
4. Вторичная инкубация № 1. Инкубируйте клетки с вторичным № 1 в 1% BSA в течение одного часа при комнатной температуре в темноте.
5. Декантируйте раствор антител и трижды промывайте клетки в PBS-T (по 5 минут на каждую промывку).

Совет: Немедленно обработайте клетки для следующего шага и не позволяйте клеткам высыхать на любом этапе.

6. Шаг блокировки № 2: инкубируйте клетки с блокирующим буфером № 2 (5% сыворотки вида, который совпадает с хозяином вторичного № 2) в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте.
7. Первичная инкубация №2: Инкубируйте клетки с первичным антителом №2 в 1% БСА или 1% сыворотке во влажной камере в темноте в течение часа при комнатной температуре или в течение ночи при 4°С.
8. Декантируйте раствор антител и трижды промывайте клетки в PBS-T (по 5 минут на каждую промывку).
9. Вторичная инкубация № 2: Инкубируйте клетки со вторичным антителом № 2 в 1% BSA в течение одного часа при комнатной температуре в темноте.
10. Декантируйте раствор вторичного антитела и трижды промывайте PBS по пять минут каждый раз в темноте.

Совет: повторите шаги 1–5 для дополнительных первичных антител. Во время различных этапов промывки обращайтесь с клетками очень осторожно, чтобы свести к минимуму возможные артефакты.

Вариант № 2: одновременная инкубация с немечеными первичными антителами
Этот метод полезен, когда первичные антитела получены от разных хозяев. Например, мышиное моноклональное антитело против антигена-X и кроличье поликлональное антитело против антигена Y.

1. После стадии блокирования инкубируйте клетки с немечеными первичными антителами в блокирующем буфере во влажной камере в течение одного часа при комнатной температуре или в течение ночи при 4°C.

Совет: блокирующий буфер можно приготовить путем смешивания сыворотки от каждого хозяина вторичных антител. В качестве альтернативы в качестве блокирующего буфера можно использовать 5% BSA в PBS-T.

2. Декантируйте раствор антител и трижды промывайте клетки в PBS-T (по 5 минут на каждую промывку).
3. Инкубируйте клетки с обоими вторичными антителами в 1% BSA в течение одного часа при комнатной температуре в темноте.

Совет: Вторичные антитела часто поставляются с широким диапазоном рабочих разведений. Рекомендуется очень тщательно выбирать разведения и использовать дополнительную оптимизацию, чтобы увидеть, какая комбинация разведений дает наилучшее возможное окрашивание антител.

4. Декантируйте раствор вторичного антитела и трижды промывайте PBS по пять минут каждый раз в темноте.

Совет: для более чистого окрашивания могут потребоваться дополнительные промывки.

Вариант № 3: одновременная инкубация с непосредственно мечеными первичными антителами
Этот метод полезен, когда первичные антитела получены от одного и того же хозяина. Например, мышь, моноклональная против антигена-X, и мышь, моноклональная против антигена-Y.

1. После этапа блокировки инкубируйте клетки с непосредственно мечеными первичными антителами в блокирующем буфере во влажной камере в течение одного часа при комнатной температуре или в течение ночи при 4°C в темноте.

Совет. Использование флуоресцентно меченного фаллодина является хорошей альтернативой иммуноокрашиванию актина в качестве эталонного маркера при ИКК.

2. Декантируйте раствор антител и трижды промывайте клетки в PBS-T (по пять минут на каждую промывку).

Совет: может потребоваться дополнительная оптимизация для определения рабочего количества и времени промывок.

Контрастное окрашивание, монтаж и визуализация

1. Когда все необходимые этапы промывки завершены, ядра клеток можно докрасить DAPI или Hoechst (1–10 мкг/мл).
2. Переверните покровное стекло на предметное стекло с каплей монтажной среды, содержащей флуоресцентное вещество, препятствующее выцветанию.

Совет: Если покровное стекло с ячейками случайно упало и ориентация «клетка вверх» утрачена, вы все равно можете спасти эксперимент, осторожно подняв покровное стекло пинцетом. Кроме того, аккуратно соскоблив одну поверхность покровного стекла кончиком пипетки, можно увидеть, удалены ли какие-либо клетки.

3. Осторожно удалите излишки монтажного материала, если это необходимо, и при необходимости закрепите лаком для ногтей.

Совет. В некоторые растворы для заливки уже добавлен DAPI, который затвердевает после контакта с воздухом, что устраняет необходимость герметизации краев покровного стекла.

4. Изучите клетки под флуоресцентным микроскопом и изображением по мере необходимости.

Совет: Избегайте длительного воздействия длины волны возбуждения флуорохрома, чтобы предотвратить фотообесцвечивание. Предметные стекла можно хранить в темноте при температуре -20°C или +4°C для повторного исследования.

ДВОЙНЫЕ ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ НАКОНЕЧНИКИ ПОСЛЕ АНАЛИЗА

Если в ваших образцах присутствует слишком много фоновой флуоресценции, попробуйте выполнить следующие рекомендации:

1. Увеличьте процент блокирующих агентов, используемых на этапе блокировки, а также в первичных и вторичных буферах для разведения антител. Увеличьте время блокировки и/или уменьшите время инкубации антител.
2. Разбавьте количество первичных и/или вторичных антител.
3. Попробуйте погасить фиксирующий агент, чтобы устранить любые свободные альдегидные группы, которые могут неспецифически связывать антитело. Погасите формальдегид 0,1 М трис- или глициновым буфером и погасите глутаровый альдегид 0,1% боргидридом натрия.

Плюсы и минусы различных методов многоцветного окрашивания
	Последовательные инкубации с немечеными антителами (непрямая детекция)	Одновременная инкубация с немечеными первичными антителами (непрямая детекция)	Одновременная инкубация с непосредственно мечеными первичными антителами (прямая детекция)
Чувствительность	Этот метод более чувствителен, поскольку несколько вторичных антител могут связываться с одним первичным антителом.	Этот метод является чувствительным, но перекрестная реакция вторичных узлов на другие узлы может быть проблемой.	Этот метод менее чувствителен, поскольку теряется усиление сигнала, обеспечиваемое вторичным антителом.
Время анализа	Этот метод требует больше всего времени из-за дополнительных инкубаций антител и стадий промывки (связанных с каждой мишенью).	Этот метод требует меньше времени, поскольку первичные и вторичные антитела инкубируются одновременно.	Этот метод занимает меньше времени, поскольку исключает этапы инкубации и промывки, связанные со вторичными антителами.
Мультиплексирование	Мультиплексирование с использованием последовательных инкубаций с немечеными антителами относительно менее сложно.	Этот метод часто сложен, так как перекрестная реактивность вторичных антител может привести к неспецифическому сигналу.	Этот метод предлагает самый простой вариант мультиплексирования, поскольку можно использовать вместе много первичных антител одного и того же вида-хозяина.
Специфика	Этот метод дает наиболее чистое окрашивание антител. Дополнительные этапы промывки (связанные с последовательными инкубациями) устраняют неспецифический сигнал.	В этом методе неспецифический фон может быть серьезной проблемой, поскольку перекрестно-реактивные вторичные антитела могут связываться с более чем одной первичной мишенью.	В этом методе неспецифический фон обычно низок, поскольку исключается вторичная перекрестная реактивность антител.
Гибкость	Этот метод предлагает наибольшую гибкость. Помимо меченых вторичных антител, он дает возможность использовать вторые первичные антитела в качестве дополнительного уровня выбора при обнаружении. Leave a Reply Cancel Reply Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены * You may use these HTML tags and attributes: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <s> <strike> <strong> Имя * Email * Сайт