Техники окрашивания: Техники окрашивания волос схемы

Современные техники окрашивания волос. — aleks-school

Окрашивание волос – один из беспроигрышных способов создания нового образа. Такое решение позволит выглядеть более свежо и стильно. Кроме того, данная процедура необходима тем, кто имеет невыразительный натуральный цвет волос или же просто хочет поэкспериментировать.

На данный момент используется ряд современных техник, которые позволяют минимизировать вред процедуры и сохранить здоровые волосы. В этом году есть несколько основных трендов окрашивания, которые помогут выглядеть стильно.

Стоит отметить, что сейчас в моде сочетание нескольких оттенков, а также создание их плавных переходов. Такие решения – интересная альтернатива классическому однотонному окрашиванию. Девушкам предлагается огромный выбор техник, с помощью которых можно с легкостью создать неповторимый образ.

Главное в этом вопросе – найти хорошего мастера, который не только поможет подобрать оптимальный вариант, но и выполнит процедуру максимально качественно.

Основные модные техники

В этом году особенно модным считается создание контраста за счет сочетания более светлых и более темных прядей. К основным техникам окрашивания можно отнести:

1. Балаяж. Такой способ позволяет создать эффект выгоревших прядей – в результате получается очень естественная прическа. Для этого создаются переходы более светлых и темных оттенков. Тона подбираются в зависимости от цвета волос. При этом такие переходы не имеют заметной границы и отличаются плавностью.
2. Скандинавский поинт. Данная техника является разновидностью блондирования и подразумевает создание плавного перехода холодных светлых оттенков на макушке к теплым на кончиках.
3. Мелирование. Сама по себе эта техника давно вышла из моды и даже считается проявлением плохого вкуса. Однако современные способы мелирования подразумевают последующее тонирование, которое позволяет создавать стильные оттенки волос. В этом году особенно модными считаются пудровые, голубые цвета. При этом внешний вид получается более мягким и естественным.
4. Омбре. Считается одним из наиболее модных трендов – в этом случае создается плавный переход темного цвета шевелюры к светлому или же наоборот. Такое решение одинаково хорошо подходит как блондинкам, так и брюнеткам. При окрашивании используется множество оттенков одного цвета, которые сочетаются по принципу градации.

Помимо этого, можно выделить технику колорирования, которая также актуальна в этом сезоне. В данном случае используется хаотичное сочетание прядей различных оттенков. Причем цвет может быть как максимально естественным, так и ярким.

Эффекты современных техник окрашивания

Окрашивание – процедура, к которой прибегают не только для смены имиджа или создания нового образа. С его помощью также можно успешно скрыть ряд недостатков. Дело в том, что главной особенностью современных техник является тщательная прокраска каждой пряди, для которой выбирается собственный оттенок. По этой причине в результате получается цвет с множеством плавных переходов. Данную особенность можно использовать для создания таких эффектов:

1. Увеличение объема. Использование переливов из различных оттенков поможет сделать волосы зрительно более густыми. Для выполнения такой задачи отлично подходит мраморное окрашивание, а также балаяж.
2. Подчеркивание длины. Зрительно «вытянуть» прическу поможет скандинавский поинт или шатуш. Последняя техника подразумевает покраску с сохранением натурального цвета на макушке (как правило, выбирается более светлая палитра).
3. Создание «эффекта укладки». Чтобы волосы выглядели более ухоженными, стоит выбрать технику с сочетанием несколько оттенков одного цвета. В данном случае хорошим решением станет колорирование.

Таким образом, выбор правильного варианта поможет сформировать продуманный образ, привлекающий взгляды!

Основные правила выбора техники

При выборе способа окрашивания стоит учитывать цвет глаз и кожи. Так, все техники блондирования не подходят кареглазым девушкам со светлой кожей. В таком случае оптимальным решением станет эффект омбре, балаяж или шатуш, в которых используются карамельные, шоколадные оттенки.

Обладательницам голубых глаз стоит использовать еще одну модную в этом сезоне технику – мелирование с созданием пепельного оттенка. Такое решение особенно смотрится особенно эффектно на коротких или волнистых шевелюрах. Отличным вариантом в этом случае станет любой из способов блондирования – от скандинавского поинта до хаотичного распределения более светлых и более темных прядей.

Техники окрашивания

Независимо от того, хотите ли вы изменить свои волосы или записались на курсы парикмахеров, вы можете еще не знать о различиях, процессах и результатах различных техник осветления волос. Не переживайте! Мы поможем вам узнать, как выглядят различные методы осветления волос!

МЕЛИРОВАНИЕ ВОЛОС

Мелирование — является самым распространенным способом осветления и придания объемности монотонным волосам. Техника набрала популярность в 90-х годах. Базовый цвет окрашивается или сохраняется неизменным, а выделенные пряди волос на несколько оттенков светлее. Для мелирования волосы обесцвечиваются прядями определенной толщины , начиная с корня до самого конца. Затем обесцвеченные волосы оборачивают в фольгу для обработки в течение от 20 минут до часа, в зависимости от желаемой степени подбора цвета.

Мелирование волос: достоинства

• Мелирование волос – один из лучших способов стать блондинкой;
• эта процедура хорошо скрывает седину;
• Переход между корнями и концами волос заметен гораздо слабее, нежели при окрашивании;
• Процедуру можно проводить один раз в 2-3 месяца;
• Волосы после мелирования выглядят красиво и ярко.

Мелирование волос: недостатки

• Не рекомендуется проводить эту процедуру минимум в течение месяца после химической завивки;
• Не рекомендуется проводить процедуру на волосах после их длительного окрашивания хной. В результате можно не получить желаемый оттенок;
• Не рекомендуется проводить мелирование волос во время беременности или при гормональном дисбалансе. Также лучше отказаться от процедуры, если волосы сильно повреждены и требуют восстановления и лечения. Не стоит в данном случае также окрашивать волосы во время беременности.
• При коррекции мелирование, попадая на ранее обесцвеченные пряди, волосы теряют качество волос. Становятся ломкими. В наше время это уже решаемая проблема. Появились препараты которые сохраняют качество волос при повторном обесцвечивании

МРАМОРНОЕ ОКРАШИВАНИЕ

Previous


Next

Как мы уже озвучили ранее, МРАМОРНОЕ ОКРАШИВАНИЕ, это не новая техника! Нам она была известна 20 лет назад. А возможно и раньше. Сейчас трудно найти человека, который сделал это первым. Но, мы точно знаем ее придумали для того, чтобы усилить яркость оттенка, придать ошеломляющий блеск тусклым волосам или мягкий эффект выгоревших волос. Эта техника раскрывает оттенок красителя разными переливами. Мраморное окрашивание это работа с цветом (краситель) в соединении с обесцвечивающими препаратами.

Мраморное окрашивание волос: достоинства

• Одним из первых преимуществ этого метода скорость выполнения. Которая положительно сказывается на сервисе. Время скоростей. Все клиенты мечтают о быстром и ошеломляющем результате
• Расход красителей. Техника выполняется на влажные волосы. Что значительно экономит краситель. И несомненно сказывается на цене.
• Простота выполнения. Облегчает работу и экономит вашу энергию
• Качество волос остается на очень высоком уровне или улучшает поврежденные волосы
• Долговечность окрашивания. Коррекция не ранее чем через 2 месяца и более

Мраморное окрашивание волос: недостатки

• Окрашивание получается в теплых или нейтральных оттенках. Для получения холодных оттенков, следует протонировать после окрашивания, нейтрализацией нежелательного оттенка

ШАТУШ

Previous


Next

Шатуш — современный тренд, известный с 2000 годов. Основа Шатуш- начес, в который уходит определённый процент волос из пряди, оставшиеся волосы осветляются, при этом пряди могут заворачиваться в конверты из фольги.

Техника шатуш: достоинства

• Универсальность. Позволяет создать эффект от выгоревших на солнце волос до тотального блонда, а также возможность получения плавных переходов от темных корней к светлым прядям по всей остальной длине волос.
• Шатуш дает очень плавный цветовой переход на волосах., от темных корней к светлым прядям по всей остальной длине волос
• Повторный визит от 3−4 месяца.

Техника шатуш: недостатки

• Затратно по времени
• Сложная техника
• Дорого

БАЛАЯЖ

Previous


Next

Весьма модная в последнее время техника окрашивания — балаяж берет начало в далеких 70-х, являясь удачной находкой французских парикмахеров. Одна из техник окрашивания волос, создающая впечатление «выгоревших на солнце прядей». Данный вид техники способствует визуальному увеличению объема волос, создает «глубину» что поможет людям с невысокой плотностью волос или девушкам со стрижками, нуждающимися в придании дополнительного объема. Как и при создании любой растяжки, окрашивание происходит в два этапа:сначала при помощи осветляющего состава на волосах создается нужный рисунок, а затем происходит тонирование в желаемый цвет.

Балаяж является разновидностью мелирования. Осветляющий состав наносится на отдельные, достаточно толстые пряди. Прокрашивается только поверхность пряди, сердцевина должна остаться нетронутой. Пряди нельзя заворачивать в конверты из фольги, потому что в этом случае прядь будет испорчена. Пряди можно только проложить фольгой, отделив друг от друга. Так самым создается нужный рисунок, переходы и эффект выгоревших волос во время летнего отпуска. Цель данной техники окрашивания в создании растяжки цвета с характерными «ребрами жесткости».

Техника балаяж: достоинства

• Щадящее осветления
• Эффект выгоревших волос. Natural
• Повторный визит от 3−4 месяца.
• Балаяж подходит для волос различных структур: тонких, вьющихся, прямых, пушистых и т.д.

Техника балаяж: недостатки

• Всегда тёплые оттенки
• Сложная техника
• Дорого

А вы хотели бы добавить изменения своим волосам? Посетите нашу Академию ! Наши студенты и специалисты обучаются всем новейшим методам осветления волос. Вы можете связаться с нами в Direct или +7(4012) 37-99-30 , чтобы сделать услугу осветления волос или записаться на обучение , если вы заинтересованы в самостоятельном изучении этих техник на наших курсах по колористике и техникам по окрашиванию волос!

Дифференциальные методы окрашивания – микробиология: лабораторный опыт

Просмотр бактериальных клеток

Микроскоп является очень важным инструментом в микробиологии, но существуют ограничения, когда дело доходит до его использования для наблюдения за клетками вообще и бактериальными клетками в частности. Двумя наиболее важными проблемами являются разрешение и контрастность. Разрешение — это ограничение, с которым мы ничего не можем поделать, поскольку большинство бактериальных клеток уже приближаются к пределу разрешения большинства световых микроскопов. Контраст, однако, можно улучшить, используя оптические системы другого типа, такие как фазово-контрастный или дифференциально-интерференционно-контрастный микроскоп, или окрашивая клетки (или фон) хромогенным красителем, который не только добавляет контраста, но и дает им тоже цвет.

В микробиологии используется множество различных красителей и процедур окрашивания. Некоторые из них включают одно окрашивание и всего несколько шагов, в то время как другие используют несколько окрашиваний и более сложную процедуру. Прежде чем приступить к процедуре окрашивания, клетки необходимо смонтировать (размазать) и зафиксировать на предметном стекле.

Бактериальный мазок — это просто небольшое количество культуры, нанесенное очень тонкой пленкой на поверхность предметного стекла. Чтобы предотвратить вымывание бактерий на этапах окрашивания, мазок можно химически или физически «фиксировать» на поверхности предметного стекла. Термофиксация — это простой и эффективный метод, который достигается путем кратковременного пропускания предметного стекла через пламя горелки Бунзена, в результате чего биологический материал более или менее постоянно прикрепляется к поверхности стекла.

Мазки, зафиксированные нагреванием, готовы к окрашиванию. При простом окрашивании к мазку добавляются красители, которые либо притягиваются за счет заряда (катионный краситель, такой как метиленовый синий или кристаллический фиолетовый), либо отталкиваются за счет заряда (анионный краситель, такой как эозин или тушь). Катионные красители связывают бактериальные клетки, что хорошо видно на ярком фоне. Анионные красители отталкиваются клетками, поэтому клетки ярко светятся на окрашенном фоне. См. рисунки 1 и 2 для примеров обоих.

Рисунок 1. Отрицательное окрашивание Cyptococcus neoformans , инкапсулированных дрожжей. Рисунок 2. Положительное окрашивание Staphylococcus aureus.

Вероятно, наиболее важным признаком, который становится очевидным при окрашивании бактериальных клеток, является их клеточная морфология (не путать с колониальной морфологией, которая представляет собой появление бактериальных колоний на чашке с агаром). Большинство гетеротрофных и культивируемых бактерий имеют несколько основных форм: сферические клетки (кокки/кокки), палочковидные клетки (бациллы/бациллы) или палочковидные клетки с изгибами или изгибами (вибрионы и спириллы соответственно). Существует большее разнообразие форм среди архей и других бактерий, обитающих в экосистемах, отличных от человеческого тела.

Часто бактерии создают специфические расположения клеток, которые формируются в результате бинарного деления бактериями по мере их размножения. Механизмы особенно очевидны для неподвижных бактерий, потому что клетки имеют тенденцию оставаться вместе после завершения процесса деления. И форма, и расположение клеток являются характеристиками, по которым можно различать бактерии. Наиболее часто встречающиеся формы бактерий (кокки и бациллы) и их возможное расположение показаны на рисунках 3 и 4.

Рисунок 3. Возможное расположение бактериальных клеток кокков.
Рисунок 4. Возможное расположение бактериальных клеток для бацилл

Дифференциальные методы окрашивания

В микробиологии методы дифференциального окрашивания используются чаще, чем простое окрашивание, как средство сбора информации о бактериях. Методы дифференциального окрашивания, которые обычно требуют более одного окрашивания и нескольких стадий, называются таковыми, потому что они позволяют дифференцировать типы клеток или клеточные структуры. Наиболее важным из них является окраска по Граму. Другие методы дифференциального окрашивания включают окрашивание эндоспор (для выявления бактерий, образующих эндоспоры), кислотоустойчивое окрашивание (для различения Mycobacterium из других бактерий), метахроматическое окрашивание для выявления гранул запаса фосфата и окрашивание капсулы (для выявления инкапсулированных бактерий). Мы будем выполнять процедуры окрашивания по Граму и эндоспор в лаборатории и просматривать подготовленные слайды, которые подчеркивают некоторые другие клеточные структуры, присутствующие в некоторых бактериях.

Окрашивание по Граму

Рисунок 5. Бактерии, окрашенные по Граму.

В 1884 году врач Ганс Кристиан Грам изучал этиологию (причину) респираторных заболеваний, таких как пневмония. Он разработал процедуру окрашивания, которая позволила ему идентифицировать бактерию в легочной ткани, взятой у умерших пациентов, как этиологический агент фатальной пневмонии. Хотя метод окрашивания по Граму мало помог в лечении болезни, метод окрашивания по Граму значительно облегчил диагностику причины смерти человека при вскрытии. Сегодня мы используем методы окрашивания по Граму, чтобы облегчить идентификацию бактерий, начиная с предварительной классификации в одну из двух групп: Грамположительные или Грамотрицательные .

Дифференциальный характер окраски по Граму основан на способности некоторых бактериальных клеток сохранять первичную окраску (кристаллический фиолетовый), сопротивляясь процессу обесцвечивания. Окрашивание по Граму включает четыре этапа. Сначала клетки окрашивают кристаллическим фиолетовым, а затем добавляют закрепитель красителя (йод). Затем применяется спирт, который избирательно удаляет окраску только с грамотрицательных клеток. Наконец, добавляется вторичный краситель, сафранин, который контрастно окрашивает обесцвеченные клетки в розовый цвет.

Хотя Грам в то время этого не знал, основное различие между этими двумя типами бактериальных клеток заключается в их клеточных стенках. Стенки грамотрицательных клеток имеют внешнюю мембрану (также называемую оболочкой), которая растворяется во время промывки спиртом. Это позволяет кристаллическому фиолетовому красителю уйти. Только обесцвеченные клетки поглощают розовый краситель сафранин, что объясняет разницу в цвете между двумя типами клеток. По завершении процедуры окрашивания по Граму грамположительные клетки становятся фиолетовыми, а грамотрицательные — розовыми.

При интерпретации окрашенного по Граму мазка необходимо также описать морфологию (форму) клеток и их расположение. На рисунке 5 представлены два различных типа бактерий, которые можно различить по реакции окрашивания по Граму, а также по их форме и расположению. Ниже опишите эти характеристики для обеих бактерий:

Кислотостойкий краситель

Некоторые бактерии производят воскообразную субстанцию ​​ миколовую кислотную , когда они строят свои клеточные стенки. Миколевая кислота действует как барьер, защищая клетки от обезвоживания, а также от фагоцитоза клетками иммунной системы хозяина. Этот восковой барьер также предотвращает проникновение красителей в клетку, поэтому окрашивание по Граму не работает с микобактериями, такими как Mycobacterium , которые являются патогенами человека и животных. Для этих бактерий используется метод кислотного – быстрого окрашивания .

Рисунок 6. Кислотоустойчивые палочки в мокроте

Для выполнения кислотостойкой окраски термофиксированный мазок заливают первичным красителем карбол-фуксин, а предметное стекло нагревают на водяной бане с водяным паром. Тепло «плавит» восковую клеточную стенку и позволяет клеткам поглощать краситель. Затем предметному стеклу дают остыть и добавляют раствор кислоты и спирта в качестве обесцвечивателя. Клетки, которые являются «кислотостойкими» из-за миколовой кислоты в их клеточной стенке, сопротивляются обесцвечиванию и сохраняют первичное окрашивание. Все остальные типы клеток будут обесцвечены. Затем в качестве контрастного красителя используется метиленовый синий. В конце концов, кислотоустойчивые бактерии (КУБ) будут окрашены в ярко-розовый цвет, а все остальные типы клеток будут казаться голубыми.

Методы окрашивания для выделения специфических клеточных структур

Капсула : Полисахаридная слизь, которая окружает некоторые виды бактерий и несколько типов эукариотических микробов, лучше всего визуализируется при отрицательном окрашивании клеток. В этом методе бактерии сначала смешивают с красителем, а затем каплю смеси распределяют по поверхности предметного стекла тонкой пленкой. При использовании этого метода капсулы выглядят как прозрачный слой вокруг бактериальных клеток с темным фоном.

Metachromatic ГРАНУЛЫ или Другие INTRACYTOPLASMIC BODIS . Одним из примеров является грамположительная бацилла Corynebacterium , которая хранит фосфат в структурах, называемых «волютин» или метахроматических гранулах, которые находятся внутри клеточной мембраны. Различные методы окрашивания используются для визуализации внутрицитоплазматических телец у бактерий, которые часто дают ключ к идентификации при наблюдении в клетках.

Окрашивание эндоспор

Эндоспоры — это спящие формы живых бактерий, и их не следует путать с репродуктивными спорами, вырабатываемыми грибами. Эти структуры производятся несколькими родами грамположительных бактерий, почти всеми бациллами, в ответ на неблагоприятные условия окружающей среды. Двумя распространенными бактериями, которые производят эндоспоры, являются Bacillus или Clostridum . Оба живут в основном в почве и как симбионты растений и животных и производят эндоспоры, чтобы выжить в среде, которая быстро и часто меняется.

Процесс эндоспоруляции (образование эндоспор) включает несколько стадий. После того, как бактериальная клетка реплицирует свою ДНК, образуются слои пептидогликана и белка, окружающие генетический материал. После полного формирования эндоспора высвобождается из клетки и может находиться в состоянии покоя в течение нескольких дней, недель или лет. Когда преобладают более благоприятные условия окружающей среды, эндоспоры прорастают и возвращаются к активной деятельности в качестве вегетативных клеток.

Зрелые эндоспоры обладают высокой устойчивостью к условиям окружающей среды, таким как тепло и химические вещества, что позволяет бактериям выживать в течение очень длительного периода времени. Эндоспоры, образовавшиеся миллионы лет назад, были успешно возвращены к жизни, просто обеспечив их водой и пищей.

Поскольку оболочка эндоспор очень устойчива к окрашиванию, был разработан специальный метод, чтобы их было легче увидеть в светлопольном микроскопе. Этот метод, называемый окрашиванием эндоспор , использует либо тепло, либо длительное время воздействия, чтобы побудить эндоспоры принять первичное окрашивание, обычно водорастворимый краситель, такой как малахитовый зеленый, поскольку эндоспоры проницаемы для воды. После этапа обесцвечивания, при котором краситель удаляется из вегетативных клеток в мазке, применяется контрастное окрашивание сафранином для придания цвета и контраста. При окрашивании этим методом эндоспоры становятся зелеными, а вегетативные клетки окрашиваются в розовый цвет, как показано на рис. 7.9.0005
Рисунок 7. Бактериальные клетки с эндоспорами, окрашенные красителем для эндоспор. Рисунок 8. Бациллы с эндоспорами при фазово-контрастной микроскопии.

Хотя сами эндоспоры устойчивы к окрашиванию по Граму, бактериальные клетки, захваченные в процессе создания этих структур, могут быть окрашены. В этом случае эндоспоры видны как четкие овальные или сферические участки внутри окрашенной клетки. Эндоспоры также можно непосредственно наблюдать в клетках с помощью фазово-контрастной микроскопии, как показано на рис. 8.9.0005

Поскольку многие методы дифференциального окрашивания требуют нескольких этапов и занимают много времени, мы не будем использовать все описанные выше методы дифференциального окрашивания.

Предварительно окрашенные предметные стекла

будут использоваться для визуализации бактериальных капсул, метахроматических гранул и кислотоустойчивых бацилл. Получите по одному предметному стеклу каждой из трех бактерий, перечисленных в таблице ниже. Просматривая эти слайды, обратите внимание на «выделенные» структуры. Ваш изолят из окружающей среды может иметь одну или несколько из этих клеточных особенностей, и научиться их распознавать поможет в идентификации. Все это следует рассматривать с помощью масляного иммерсионного объектива.

Окраска по Граму

Все процедуры окрашивания следует проводить над раковиной. Будет продемонстрирована процедура окрашивания по Граму, а обзор представлен в таблице 1.

Доброволец с вашего лабораторного стола должен получить культуры бактерий, которые вы будете использовать в этой лаборатории, в соответствии с указаниями вашего инструктора. Одна из культур будет грамположительной бактерией, а другая — грамотрицательной. Ниже напишите названия бактерий, которые вы будете использовать, вместе с BSL для каждой культуры:

________________________________________________________________________________________________

Возьмите два предметных стекла и приготовьте мазок каждой из двух бактериальных культур, по одной на предметное стекло, как показано на рисунке. Дать ПОЛНОСТЬЮ высохнуть на воздухе и зафиксировать теплом. Оба мазка окрасить по Граму. Рассмотрите слайды с помощью светового микроскопа с увеличением в 1000 раз и запишите свои наблюдения в таблицу ниже.

Окраска по Граму «Окончательный осмотр»: приготовьте мазок, содержащий смесь грамположительных и грамотрицательных бактерий, добавив небольшое количество каждой бактерии в одну каплю воды на предметном стекле. Нагревание фиксирует мазок и окрашивает его по Граму. Вы должны быть в состоянии определить реакцию окрашивания по Граму, клеточную морфологию и расположение ОБЕИХ бактерий в этом смешанном мазке. Ваш преподаватель может попросить показать этот слайд и предложить конструктивный комментарий.

Окрашивание эндоспор

Лишь несколько родов бактерий продуцируют эндоспоры, и почти все они являются грамположительными бациллами. Наиболее примечательны виды Bacillus и Clostridium , которые естественным образом обитают в почве и являются обычными загрязнителями поверхностей. Рост Clostridium spp. обычно ограничивается анаэробной средой; Bacillus spp. могут расти аэробно и анаэробно. Эндоспорообразующие бактерии отличаются от других групп грамположительных бацилл и отличаются своими эндоспорами.

Обзор процедуры окрашивания эндоспор представлен в таблице 2.

После окрашивания эндоспоры обычно выглядят как светло-зеленые овальные или сферические структуры, которые можно увидеть внутри или снаружи вегетативных клеток, которые кажутся розовыми.

Форма и расположение эндоспор внутри бактериальных клеток, а также то, расширяются ли спорангии (D) или не расширяются (ND) стороны клетки, являются важными характеристиками, которые помогают различать виды (см. рис. 9).).

Рисунок 9

1. Овальный, центральный, не расширенный (ND)
2. Овальный, терминальный, ND (и параспоральный кристалл)
3. Овальный, концевой, расширенный (D)
4. Овал, центральный, D
5. Сферический, концевой, D
6. Овальный, боковой, D

Эндоспоры достаточно устойчивы к большинству процедур окрашивания; однако в обычно окрашенном мазке они могут быть видны как «очертания» с чистым пространством внутри. Если вы наблюдаете «очертания» или то, что кажется «призраками» клеток в окрашенном по Граму мазке грамположительных бацилл, то следует также выполнить окрашивание эндоспор, чтобы подтвердить наличие или отсутствие эндоспор.

Доброволец с вашего лабораторного стола должен получить бактериальные культуры для окрашивания эндоспор в соответствии с указаниями вашего инструктора. Обратите внимание, что все они будут видами Bacillus . Подготовить мазки и окрасить каждый, используя технику окрашивания эндоспор. Рассмотрите слайды и отметьте форму и расположение эндоспоры, а также внешний вид спорангиев (набухшие или не набухшие) в таблице ниже:

Кроме того, выберите ОДНУ из приведенных выше культур и окрасьте ее по Граму. Запишите свои результаты ниже в отведенных местах:

Наименование культуры, окрашенной по Граму: _________________________________________________________

Реакция окрашивания по Граму и клеточная морфология: ___________________________________________

Видны ли эндоспоры в мазке, окрашенном по Граму? _________________ Если вы видите эндоспоры, опишите, как они выглядят в препарате, окрашенном по Граму, и чем они похожи и отличаются от того, что вы видите в препарате, окрашенном эндоспорами.

4.1: Введение в окрашивание — Биология LibreTexts

1. Последнее обновление

2. Сохранить как PDF

• Джоан Петерсен и Сьюзан Маклафлин
• Общественный колледж Квинсборо

4

Цели обучения

• Описать различия между методами простого окрашивания и дифференциального окрашивания.
• Обсудите, как приготовить бактериальный мазок из культивируемых организмов.
• Различают грамположительные и грамотрицательные бактерии.
• Опишите процесс окрашивания по Граму.
• Используйте микроскопию для исследования клеток, окрашенных по Граму.
• Опишите отдельные специальные процедуры окрашивания и просмотрите их примеры при погружении в масло.

 

Почему мы должны окрашивать бактерии?

Большинство типов клеток не имеют большого количества естественного пигмента, и поэтому их трудно увидеть под световым микроскопом, если они не окрашены. Несколько типов красителей используются, чтобы сделать бактериальные клетки более заметными. Кроме того, можно использовать специальные методы окрашивания для определения биохимических или структурных свойств клеток, таких как тип клеточной стенки и наличие или отсутствие эндоспор. Этот тип информации может помочь ученым идентифицировать и классифицировать микроорганизмы и может использоваться поставщиками медицинских услуг для диагностики причины бактериальной инфекции.

 

Простая окраска

Одним из типов процедуры окрашивания, которую можно использовать, является простая окраска , при которой используется только одна окраска, и все типы бактерий проявляются в цвете этой окраски при просмотре под микроскоп. Некоторые красители, обычно используемые для простого окрашивания, включают кристаллический фиолетовый, сафранин и метиленовый синий. Простые окраски можно использовать для определения морфологии и расположения видов бактерий, но они не дают никакой дополнительной информации. Живые бактерии почти бесцветны и не создают достаточного контраста с водой, в которой они взвешены, чтобы быть хорошо видимыми. Целью окрашивания является увеличение контраста между организмами и фоном, чтобы их было легче увидеть в световой микроскоп. При простом окрашивании бактериальный мазок окрашивается раствором одного красителя, который окрашивает все клетки в один цвет без дифференциации типов или структур клеток. В нашей лаборатории используется единственный краситель – метиленовый синий, основной краситель. Основные красители, имеющие положительный заряд, прочно связываются с отрицательно заряженными компонентами клеток, такими как бактериальные нуклеиновые кислоты и клеточные стенки.

 

Изображение 1: Вид под микроскопом бактерий в форме бацилл (палочков), окрашенных кристаллическим фиолетовым. Изолировано и изображено Мунтасиром Аламом, Университет Дакки, факультет микробиологии, в 2007 г.

Смотреть видео 1: Как нанести простой краситель на бактериальную культуру от NC BioNetwork (4:05) URL: https://youtu.be/8ODeT9DLHKI

 

Окраска по Граму

Ученые часто предпочитают проводить дифференциальную окраску , поскольку это позволяет им собрать дополнительную информацию о бактериях, с которыми они работают. Дифференциальные красители используют более одного красителя, и клетки будут иметь различный внешний вид в зависимости от их химических или структурных свойств. Некоторыми примерами дифференциального окрашивания являются окрашивание по Граму, кислотоустойчивое окрашивание и окрашивание эндоспор. Вы узнаете, как подготовить бактериальные клетки к окрашиванию, и узнаете о методе окрашивания по Граму.

Эта широко используемая процедура окрашивания была впервые разработана датским бактериологом Гансом Христианом Грамом в 1882 г. (опубликовано в 1884 г.) при работе с образцами тканей легких пациентов, умерших от пневмонии. С тех пор процедура окрашивания по Граму повсеместно используется микробиологами для получения важной информации о видах бактерий, с которыми они работают. Знание реакции Грама клинического изолята может помочь медицинскому работнику поставить диагноз и выбрать подходящий антибиотик для лечения.

Результаты окрашивания по Граму отражают различия в составе клеточной стенки. Грамположительные клетки имеют толстые слои пептидогликана (углевода) в клеточных стенках; Грамотрицательных бактерий очень мало. Грамположительные бактерии также содержат тейхоевые кислоты, а грамотрицательные – нет. Грамотрицательные клетки имеют наружную мембрану, напоминающую фосфолипидный бислой клеточной мембраны. Наружная мембрана содержит липополисахариды (ЛПС), которые высвобождаются в виде эндотоксины при гибели грамотрицательных клеток. Это может беспокоить человека с инфекцией, вызванной грамотрицательным микроорганизмом.

Изображение 2: Микроскопическое изображение окраски по Граму смешанных грамположительных кокков ( Staphylococcus aureus ATCC 25923, фиолетовый) и грамотрицательных бацилл ( Escherichia coli 75 ATCC 1, красный). Увеличение: 1000. Изображение Y Тамбе. https://commons.wikimedia.org/wiki/F…m_stain_01.jpg

 

На рисунке 1 ниже показаны основные различия между грамположительными и грамотрицательными клеточными стенками. Различия в составе клеточной стенки отражаются в том, как клетки реагируют на красители, используемые в процедуре окрашивания по Граму.

Окрашивание по Граму лучше всего проводить на свежих культурах — более старые клетки могут иметь поврежденные клеточные стенки и не давать правильной реакции по Граму. Некоторые виды известны как грамвариабельные , поэтому на предметном стекле могут быть видны как грамположительные, так и грамотрицательные реакции.

Неправильная техника окрашивания может привести к неточным результатам. Одним из наиболее важных этапов окрашивания по Граму является этап обесцвечивания (использование спирта/ацетона). Если обесцвечиватель не оставлять на достаточно долгое время, он не сможет различать грамположительные и грамотрицательные бактерии. На этом этапе используется обесцвечиватель, изготовленный из смеси спирта и ацетона. Его функция у грамотрицательных бактерий заключается в удалении внешней клеточной мембраны и тонкого слоя пептидогликана. Клеточная мембрана в основном состоит из липидов и чувствительна к спиртам. При растворении этих слоев комплекс кристаллический фиолетовый-йод также удаляется, и, таким образом, грамотрицательные бактерии теперь могут поглощать вторичный краситель, сафранин, который используется на последнем этапе окрашивания по Граму, окрашивая их в розовато-красный цвет и дифференцируя между ними и грамположительными, которые благодаря своему толстому пептидогликановому слою сохранили первичную окраску, кристаллический фиолетовый, и выглядят пурпурно-синими. С другой стороны, если вы используете слишком много обесцвечивателя, он может обесцветить образец на предметном стекле, что приведет к потере комплекса кристаллический фиолетовый (основной краситель) с йодом. Стадия обесцвечивания чувствительна из-за структуры клеточной стенки. Даже грамположительные бактерии с их толстыми клеточными стенками могут чрезмерно обесцвечиваться, что приводит к потере пептидогликанового слоя и комплекса кристаллический фиолетовый-йод. Когда на последнем этапе используется вторичный краситель, сафранин, грамположительные бактерии подхватывают это окрашивание и становятся красновато-розовыми, а не пурпурно-синими. Посмотрите видео 2 для примера этого.

Еще одной распространенной ошибкой является подготовка бактериального мазка, который является первым этапом любой процедуры окрашивания. Это включает в себя нанесение тонкой пленки бактерий на предметное стекло микроскопа, а затем термофиксацию   с помощью бунзеновской горелки, баксинизатора или нагревателя предметного стекла. Основная цель этого шага — прикрепить бактериальные клетки к предметному стеклу микроскопа (это также денатурирует белки и убивает их). Если вы забудете сделать этот шаг, клетки будут «смываться» на всех последующих этапах процесса окрашивания. У вас буквально не будет клеток на предметном стекле для окрашивания!

Хотя подавляющее большинство бактерий либо грамположительны, либо грамотрицательны, важно помнить, что не все бактерии можно окрасить с помощью этой процедуры (например, микоплазмы, не имеющие клеточной стенки, плохо окрашиваются по Граму). .

Рисунок 1:  Грамположительные и грамотрицательные клеточные стенки

 

Смотреть видео 2: Окрашивание по Граму Анимация и обсуждение того, что происходит на каждом этапе.

Смотреть видео 2 : Анимация окрашивания по Граму с описанием каждого шага и интерпретацией того, что происходит на каждом шаге на

Анимационные медицинские видеоролики доктора Г. Бхану Пракаша. (3:37) URL https://youtu.be/AZS2wb7pMo4

 

Смотреть видео 3. Процедура окрашивания по Граму

Смотреть видео 2. Процедура окрашивания по Граму , снято в микробиологических лабораториях штата Северная Каролина. (5:58). URL: https://youtu.be/H-fxk1be1hQ

 

Специальные красители

Существует множество процедур окрашивания, используемых для выявления определенных внешних или внутренних структур, которые не обнаруживаются у всех видов бактерий, например, окрашивание капсулы. и пятно на жгутиках. Изображения и другие примеры специализированных пятен см. ниже и в следующем разделе 4.2 специализированных методов окрашивания бактерий.

Краситель для капсул

Некоторые бактерии выделяют богатую полисахаридами структуру за пределами клеточной стенки, называемую гликокаликсом. Если гликокаликс тонкий и слабо прикреплен, его называют слоем слизи ; если он толстый и плотно связан с клеткой, его называют капсулой . Гликокаликс может защищать клетку от высыхания и позволяет клетке прилипать к поверхностям, таким как ткани в организме. Они также могут обеспечивать защиту клеток от обнаружения и фагоцитоза иммунными клетками и способствовать образованию биопленки: таким образом, гликокаликс может действовать как фактор вирулентности; (способствует способности организма вызывать заболевание).

Капсулы можно обнаружить с помощью процедуры отрицательного окрашивания , при которой фон (препарат) и бактерии окрашиваются, но капсула не окрашивается. Капсула выглядит как четкая неокрашенная зона вокруг бактериальной клетки. Поскольку капсулы разрушаются при нагревании, процедура окрашивания капсул проводится без термофиксации бактерий.

Серебряный краситель

Жгутики (длинные хлыстообразные структуры, используемые для подвижности бактерий) и некоторые бактерии (например, спирохеты ) слишком тонкие, чтобы их можно было наблюдать при обычных процедурах окрашивания.